hi
jak se od sebe liší EGFP a GFP?
a rozpozná protilátka proti GFP také EGFP? pokud obě vyžadují jiné protilátky, můžete mi říct jejich názvy
díky

FPGP (Enhanced GFP) a GFP se liší několika aminokyselinami, díky kterým EGFP fluoreskuje silněji než GFP. Protilátka anti-GFP může rozpoznat i EGFP. Já používám protilátku anti-GFP od společnosti Abcam, která rozpoznává EGFP.

EGFP je mutant GFP. Má zvýšenou fluorescenci a hlavní excitační pík proteinu byl posunut na 490 nm, přičemž emisní pík zůstal na 509 nm (EGFP).
U protilátky anti-GFP by mělo být možné EGFP detekovat.

Předpokládá se také, že EGFP je o něco méně toxický pro exprimující buňky. Všechny protilátky proti GFP, se kterými jsem pracoval, identifikují EGFP stejně dobře jako nativní GFP. Ta od Clontechu je skvělá!

Je možné jednoduchou mutagenezí změnit EGFP na RFP nebo YFP?

polyklonální anti-GFP z Cell signaling funguje dobře, žádný rozdíl pro původní GFP, EGFP nebo mGFP;
CFP a YFP jsou mutace GFP, myslím, že klonování s příslušnými vektory se zdá být jednodušší než mutace GFP; RFP? – o tom jsem nikdy neslyšel, DSred (Clontech) funguje dobře

Radši bych pracoval s příslušnými fluorescenčními protienovými vektory než je mutoval. Je to mnohem jednodušší. Místo YFP bych pracoval s venusem ( upravená verze YFP) a pro RFP bych pracoval s DsRed2 nebo mCherry nebo mStrawberry (Tsienova laboratoř) – v závislosti na experimentech.

dsRed a ostatní červené fluorescenční proteiny jsou zcela odlišné od GFP, takže protilátky proti GFP s nimi nebudou fungovat. Varianty CFP, YFP a eGFP mají oproti GFP malé změny a budou detekovány protilátkami proti GFP.

Slyšel jsem, že se liší kvůli bodové mutaci. Fenylalanin na leucin, pokud si dobře vzpomínám.