ABSTRACT

Analýza genové exprese je běžným výzkumným nástrojem ke studiu sítí řídících genovou expresi, úlohy genů s neznámou funkcí a environmentálně indukovaných reakcí organismů. Většina analytických nástrojů používaných k analýze genové exprese závisí na přesné syntéze a kvantifikaci cDNA, aby bylo možné získat reprodukovatelné a kvantifikovatelné výsledky. Většina komerčních souprav pro izolaci a purifikaci cDNA se zatím zaměřuje na dvouřetězcové molekuly, které přesně nereprezentují množství transkriptů. V této zprávě uvádíme jednoduchou a rychlou metodu purifikace jednořetězcové cDNA, která vykazuje vysokou čistotu a výtěžnost. Tato metoda je založena na ošetření RNázou H a RNázou A po syntéze cDNA, po níž následuje separace v křemíkových spinových kolonách a srážení etanolem. Kromě toho se naše metoda vyhýbá použití DNázy I k odstranění genomové DNA z přípravků RNA, což zlepšuje výtěžnost cDNA. Naše metoda se ukázala jako užitečná při purifikaci jednovláknové cDNA z patogenní houby Sporothrix schenckii.

.