Prezentováno na: ASRM 2017 – San Antonio, Texas
Cíl: Stanovit výskyt a ploidní stav použitelných embryí získaných z oocytů, které v době hodnocení oplození nevykazují dvě pronuklea (0PN)
Design: Retrospektivní studie v soukromé laboratoři pro in vitro fertilizaci.
Materiál a metody: Celkem 3 370 blastocyst bylo identifikováno jako morfologicky vhodné pro transfer čerstvých embryí, vitrifikaci nebo biopsii trofektodermu pro genetické vyšetření ploidního stavu s následnou vitrifikací (tj. použitelné blastocysty). Použitelné blastocysty byly získány 5., 6. nebo 7. den. Zralé oocyty byly oplodněny pomocí ICSI a 16-18 h po inseminaci bylo provedeno a zaznamenáno pronukleární hodnocení pomocí inverzního mikroskopu. Embrya se 2 pronuclei byla oddělena od všech ostatních embryí vzniklých ze zygot 0PN, 1PN, 3PN a ≥4PN. Embrya byla skupinově kultivována v kontinuální jednotné kultivační půdě (Irvine Scientific). Počet chromozomálních kopií byl u vhodných blastocyst vyhodnocen pomocí platformy Illumina MiSeq. Embrya označená jako normální neměla detekovatelnou aberaci počtu kopií při prahové hodnotě ≤ 30 %. Prahová hodnota ≥50 % byla definována pro jakýkoli zisk/ztrátu celého chromozomu pro chromozomy 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, 17, 19 a/nebo 22. Práh ≥30 % byl stanoven pro chromozomy 6, 7, 8, 9, 11, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 21, X, Y a jakékoli segmentální duplikace a/nebo delece pro kterýkoli z chromozomů. Výsledek komplexní abnormality byl definován jako kombinace tří nebo více abnormalit počtu kopií sestávajících z trisomie a/nebo monosomie.
Výsledky: V průběhu 18 měsíců bylo při 830 odběrech čerstvých oocytů získáno 7 258 zygot se dvěma haploidními pronuklei (2PN). Z těchto 2PN zygot se vyvinulo 3 349 použitelných blastocyst (46 %). U 2,9 % odebraných oocytů byly použitelné blastocysty získané z oocytů, které v době hodnocení oplození nevykazovaly pronukleus (0PN). Vitrifikováno bylo 24 použitelných blastocyst (ze zygot 0PN) od 24 různých pacientek. U 14 (58 %) z těchto blastocyst nebyl potvrzen počet chromozomálních kopií. 10 blastocyst získaných ze zygot 0PN bylo vyšetřeno metodou PGS. Čtyři embrya (44 %) byla hlášena jako normální, zatímco dvě embrya byla hlášena jako abnormální XO a tři embrya jako komplexní abnormální XY. Dosud nedošlo k přenosu použitelné blasotocysty odvozené z 0PN.
Tabulka 1: Ploidní stav použitelných blastocyst z 0PN
| Embryo | Diagnostika trofektodermu |
| 1 | Komplexní +5, +8, +16; XY |
| 2 | Normální; XO |
| 3 | Komplex -2, -3, +6, -8, -12; XY |
| 4 | Komplex +3, -5, +19, -15, -16, -17, -18. -19, +20, +21; XO |
| 5 | Normální; XO |
| 6 | Normální XX |
| 7 | Normální XX |
| 8 | Normální XY |
| 9 | Normální XY |
| 10-24 | Neznámý |
Závěr: Naše výsledky ukazují, že použitelné blastocysty odvozené ze zygot s abnormální tvorbou pronukleárů (0PN) se mohou vyvinout v chromozomálně normální embryo. Tato embrya však mohou mít také vysokou pravděpodobnost vícenásobných chromozomálních zisků nebo ztrát. Tyto výsledky jsou podobné předchozím zprávám o vývojovém potenciálu, chromozomální analýze a probíhajících těhotenstvích ze zygot obsahujících abnormální pronukleus1-3. Pacientky by měly být poučeny o chromozomálních abnormalitách spojených s netestovanými použitelnými blastocystami pocházejícími z atypických zygot. Další vyšetřování ploidního stavu použitelných blastocyst odvozených z abnormálních zygotických embryí s jedním pronukleem (1PN), třemi pronuklei (3PN) nebo vyššími (≥4PN) může poskytnout další informace týkající se retenční hodnoty abnormálních pronukleárních zygot.
.