hi
wie unterschiedlich sind EGFP und GFP voneinander?
und erkennt der GFP Antikörper auch EGFP? wenn beide verschiedene Antikörper benötigen, kannst du mir ihre Namen sagen
Danke

Das EGFP (Enhanced GFP) und GFP unterscheiden sich durch einige Aminosäuren, die EGFP stärker fluoreszieren lassen als GFP. Ein Anti-GFP-Antikörper kann auch EGFP erkennen. Ich verwende einen Anti-GFP von Abcam, um EGFP zu erkennen.

EGFP ist eine Mutante von GFP. Es hat eine erhöhte Fluoreszenz und der Hauptanregungspeak des Proteins wurde auf 490 nm verschoben, während der Emissionspeak bei 509 nm liegt (EGFP).
Es sollte möglich sein, EGFP mit einem Anti-GFP-Antikörper zu erkennen.

EGFP soll auch etwas weniger toxisch für die Zellen sein, die es exprimieren. Alle GFP-Antikörper, mit denen ich gearbeitet habe, erkennen EGFP genauso gut wie natives GFP. Der von Clontech ist großartig!

Ist es möglich, EGFP durch einfache Mutagenese in RFP oder YFP umzuwandeln?

polyklonales Anti-GFP von Cell Signaling funktioniert gut, kein Unterschied zu originalem GFP, EGFP oder mGFP;
CFP und YFP sind Mutationen von GFP, ich denke, das Klonen mit den entsprechenden Vektoren scheint einfacher zu sein als das Mutieren von GFP; RFP? – nie gehört, DSred (Clontech) funktioniert gut

Ich würde es vorziehen, mit den entsprechenden fluoreszierenden Protienvektoren zu arbeiten, als sie zu mutieren. Das ist viel einfacher. Anstelle von YFP würde ich mit Venus arbeiten (eine modifizierte Version von YFP) und für RFP würde ich mit DsRed2 oder mCherry oder mStrawberry (Tsiens Labor) arbeiten – je nach den Experimenten.

dsRed und die anderen rot fluoreszierenden Proteine unterscheiden sich deutlich von den GFPs, so dass Antikörper gegen GFP bei ihnen nicht funktionieren. Die CFP-, YFP- und eGFP-Varianten sind alle kleine Veränderungen von GFP und werden von GFP-Antikörpern erkannt.

Ich habe gehört, dass sie sich aufgrund einer Punktmutation unterscheiden. Phenylalanin zu Leucin, wenn ich mich recht erinnere.