ABSTRACT

Die Analyse der Genexpression ist ein gängiges Forschungsinstrument zur Untersuchung von Netzwerken, die die Genexpression kontrollieren, der Rolle von Genen mit unbekannter Funktion und umweltbedingter Reaktionen von Organismen. Die meisten der für die Analyse der Genexpression verwendeten Analyseinstrumente sind auf eine genaue cDNA-Synthese und Quantifizierung angewiesen, um reproduzierbare und quantifizierbare Ergebnisse zu erhalten. Bisher sind die meisten kommerziellen Kits für die Isolierung und Reinigung von cDNA auf doppelsträngige Moleküle ausgerichtet, die die Fülle der Transkripte nicht genau wiedergeben. Im vorliegenden Bericht stellen wir eine einfache und schnelle Methode zur Aufreinigung einzelsträngiger cDNA vor, die sich durch hohe Reinheit und Ausbeute auszeichnet. Diese Methode basiert auf der Behandlung mit RNase H und RNase A nach der cDNA-Synthese, gefolgt von einer Trennung in Silika-Spin-Säulen und einer Ethanolfällung. Darüber hinaus vermeidet unsere Methode die Verwendung von DNase I zur Beseitigung genomischer DNA aus RNA-Präparaten, was die cDNA-Ausbeute verbessert. In einem Fallbericht erwies sich unsere Methode als nützlich für die Reinigung von einzelsträngiger cDNA aus dem pathogenen Pilz Sporothrix schenckii.