Presented at: ASRM 2017 – San Antonio, Texas
Zielsetzung: Bestimmung des Vorkommens und des Ploidiestatus von verwertbaren Embryonen, die aus Eizellen stammen, die zum Zeitpunkt der Befruchtungsbeurteilung keine zwei Pronuklei (0PN) aufweisen.
Design: Retrospektive Studie in einem privaten In-vitro-Fertilisationslabor.
Materialien und Methoden: Insgesamt wurden 3.370 Blastozysten identifiziert, die morphologisch für einen frischen Embryotransfer, eine Vitrifikation oder eine Trophektoderm-Biopsie zur genetischen Untersuchung des Ploidiestatus mit anschließender Vitrifikation geeignet waren (d.h. verwendbare Blastozysten). Verwertbare Blastozysten wurden an Tag 5, 6 oder 7 gewonnen. Die reifen Eizellen wurden mit ICSI befruchtet, und 16-18 Stunden nach der Befruchtung wurde die Pronuklearisierung mit einem inversen Mikroskop durchgeführt und aufgezeichnet. Embryonen mit 2 Vorkernen wurden von allen anderen Embryonen getrennt, die aus 0PN-, 1PN-, 3PN- und ≥4PN-Zygoten entstanden. Die Embryonen wurden in Gruppen in einem kontinuierlichen Einzelkulturmedium (Irvine Scientific) kultiviert. Die Chromosomenkopienzahl wurde für geeignete Blastozysten mit der Illumina MiSeq-Plattform bestimmt. Als normal eingestufte Embryonen wiesen bei einem Schwellenwert von ≤30 % keine nachweisbare Kopienzahlaberration auf. Ein Schwellenwert von ≥50 % wurde für jeden vollständigen Chromosomengewinn/-verlust für die Chromosomen 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, 17, 19 und/oder 22 definiert. Ein Schwellenwert von ≥30% wurde für die Chromosomen 6, 7, 8, 9, 11, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 21, X und Y sowie für segmentale Duplikationen und/oder Deletionen bei einem der Chromosomen festgelegt. Das Ergebnis einer komplexen Anomalie wurde definiert als eine Kombination von drei oder mehr Kopienzahlanomalien, bestehend aus Trisomie und/oder Monosomie.
Ergebnisse: Im Laufe von 18 Monaten führten 830 frische Eizellenentnahmen zu 7.258 Zygoten mit zwei haploiden Pronuklei (2PN). Diese 2PN-Zygoten entwickelten sich zu 3.349 brauchbaren Blastozysten (46 %). Bei 2,9 % der entnommenen Eizellen wurden verwertbare Blastozysten aus Eizellen gewonnen, die zum Zeitpunkt der Befruchtungsuntersuchung keine Vorkerne (0PN) aufwiesen. 24 brauchbare Blastozysten (aus 0PN-Zygoten) von 24 verschiedenen Patienten wurden vitrifiziert. 14 (58 %) dieser Blastozysten wurden nicht auf eine Bestätigung der Chromosomenkopienzahl untersucht. 10 Blastozysten, die von 0PN-Zygoten stammten, wurden mittels PGS untersucht. Vier Embryonen (44 %) wurden als normal eingestuft, während zwei Embryonen als abnormal XO und drei Embryonen als komplex abnormal XY eingestuft wurden. Bisher ist noch kein Transfer einer brauchbaren, aus einer 0PN abgeleiteten Blasotocyste erfolgt.
Tabelle 1: Ploidiestatus von verwertbaren 0PN-Blastozysten
| Embryo | Trophektoderm-Diagnose |
| 1 | Komplex +5, +8, +16; XY |
| 2 | Abnormal; XO |
| 3 | Komplex -2, -3, +6, -8, -12; XY |
| 4 | Komplex +3, -5, +19, -15, -16, -17, -18. -19, +20, +21; XO |
| 5 | Abnormal; XO |
| 6 | Normal XX |
| 7 | Normal XX |
| 8 | Normal XY |
| 9 | Normal XY |
| 10-24 | Unbekannt |
Zusammenfassung: Unsere Ergebnisse zeigen, dass sich brauchbare Blastozysten, die aus Zygoten mit abnormaler Pronuklearbildung (0PN) stammen, zu einem chromosomal normalen Embryo entwickeln können. Diese Embryonen können jedoch auch eine hohe Wahrscheinlichkeit für multiple Chromosomengewinne oder -verluste aufweisen. Diese Ergebnisse ähneln früheren Berichten über das Entwicklungspotenzial, die Chromosomenanalyse und laufende Schwangerschaften von Zygoten mit abnormalen Vorkernen1-3. Die Patientinnen sollten über die Chromosomenanomalien aufgeklärt werden, die mit nicht getesteten, verwendbaren Blastozysten aus atypischen Zygoten verbunden sind. Weitere Untersuchungen des Ploidiestatus von verwendbaren Blastozysten, die aus abnormalen zygotischen Embryonen mit einem einzigen Vorkern (1PN), drei Vorkernen (3PN) oder mehr (≥4PN) stammen, können weitere Informationen über den Retentionswert abnormaler pronukleärer Zygoten liefern.