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Combien l’EGFP et la GFP sont-elles différentes l’une de l’autre ?
et l’anticorps de la GFP reconnaît-il aussi l’EGFP ? si les deux nécessitent des anticorps différents, pouvez-vous me dire leurs noms
merci

L’EGFP (Enhanced GFP) et la GFP diffèrent pour quelques acides aminés qui rendent l’EGFP plus fluorescente que la GFP. Un anticorps anti-GFP peut reconnaître aussi l’EGFP. J’utilise un anti-GFP d’Abcam pour reconnaître l’EGFP.

L’EGFP est un mutant de la GFP. Il a une fluorescence accrue et le pic d’excitation majeur de la protéine a été déplacé à 490 nm avec le pic d’émission conservé à 509 nm (EGFP).
U devrait pouvoir détecter l’EGFP avec un anticorps anti-GFP.

L’EGFP est également pensé pour être un peu moins toxique pour les cellules qui l’expriment. Tous les anticorps GFP avec lesquels j’ai travaillé identifient l’EGFP aussi bien que la GFP native. Celui de clontech est génial !

Est-il possible de changer l’EGFP en RFP ou YFP par simple mutagenèse ?

L’anti-GFP polyclonal de Cell signaling fonctionne bien, aucune différence pour la GFP originale, l’EGFP ou la mGFP;
CFP et YFP sont des mutations de la GFP, je pense que le clonage avec les vecteurs correspondants semble être plus simple que de muter la GFP ; RFP ? – jamais entendu parler, DSred (Clontech) fonctionne bien

Je préférerais travailler avec les vecteurs de protien fluorescent respectifs que de les muter. C’est beaucoup plus facile. Au lieu de YFP, je travaillerais avec venus ( une version modifiée de YFP) et pour RFP, je travaillerais avec DsRed2 ou mCherry ou mStrawberry (laboratoire de Tsien)- selon les expériences.

dsRed et les autres protéines fluorescentes rouges sont bien distinctes des GFP, donc les anticorps contre la GFP ne fonctionneront pas avec elles. Les variantes CFP, YFP et eGFP sont toutes de petites modifications de la GFP et seront détectées par les anticorps de la GFP.

J’ai entendu dire qu’elles étaient différentes à cause d’une mutation ponctuelle. Phénylalanine à Leucine si je me souviens bien.