ABSTRACT

L’analyse de l’expression des gènes est un outil de recherche commun pour étudier les réseaux contrôlant l’expression des gènes, le rôle des gènes avec une fonction inconnue, et les réponses induites par l’environnement des organismes. La plupart des outils analytiques utilisés pour analyser l’expression des gènes reposent sur une synthèse et une quantification précises de l’ADNc pour obtenir des résultats reproductibles et quantifiables. Jusqu’à présent, la plupart des kits commerciaux pour l’isolement et la purification de l’ADNc ciblent des molécules à double brin, qui ne représentent pas avec précision l’abondance des transcrits. Dans le présent rapport, nous proposons une méthode simple et rapide pour purifier l’ADNc simple brin, avec une pureté et un rendement élevés. Cette méthode est basée sur le traitement avec la RNase H et la RNase A après la synthèse de l’ADNc, suivi de la séparation dans des colonnes de spin en silice et de la précipitation à l’éthanol. En outre, notre méthode évite l’utilisation de la DNase I pour éliminer l’ADN génomique des préparations d’ARN, ce qui améliore le rendement en ADNc. À titre de rapport de cas, notre méthode s’est avérée utile pour la purification d’ADNc simple brin à partir du champignon pathogène Sporothrix schenckii.