Implication clinique

L’instabilité des microsatellites (MSI) résulte de l’accumulation systématique de délétions/insertions dans de courtes séquences d’ADN répétitives dans les cellules tumorales dont le système de réparation des mésappariements (MMR) est déficient. La MSI est présente dans environ 15 % de tous les cancers colorectaux et est cliniquement utile pour identifier les patients atteints de cancer colorectal héréditaire sans polypose (HNPCC, syndrome de Lynch) causé par des mutations germinales des gènes MMR. Le statut MSI peut également prédire la réponse/résistance du cancer à certaines chimiothérapies.

Dans une tentative de normalisation de l’analyse MSI, un atelier du National Cancer Institute (NCI) de 1997 a recommandé un panel de référence de cinq marqueurs microsatellites pour la détection du MSI et a établi des directives de classification MSI sur la base des résultats. Le panel de référence, appelé panel Bethesda, se compose de deux loci mononucléotidiques (Big Adenine Tract ou BAT-25 et BAT-26) et de trois loci dinucléotidiques (D2S123, D5S346 et D17S250). À l’aide du panel de Bethesda, les cancers présentant une instabilité à au moins 2 de ces loci ont été interprétés comme étant des MSI-high (MSI-H), et les cancers ne présentant aucune instabilité à aucun des cinq loci ont été considérés comme stables au niveau des microsatellites (MSS). Lors d’un autre atelier de suivi du NCI, il a été reconnu que la sensibilité et la spécificité du panel original de Bethesda pouvaient être limitées en raison de l’inclusion de répétitions dinucléotidiques, qui sont moins sensibles et moins spécifiques que les répétitions mononucléotidiques pour l’identification des cancers présentant des déficiences MMR. Il a été suggéré qu’un panel de répétitions mononucléotidiques quasimonomorphes, pourrait être suffisamment sensible et spécifique pour la détection des cancers à haute MSI et pourrait éviter la nécessité d’un ADN de correspondance normal pour les tumeurs testées (1-8).

Système d’analyse MSI (kit à usage de recherche uniquement, version 1.2, Promega Corporation).

Le système d’analyse MSI est un test multiplex, fluorescent, basé sur la PCR pour la détection de l’instabilité des microsatellites. Le système d’analyse MSI comprend des amorces marquées par fluorescence pour la co-amplification de cinq marqueurs répétés mononucléotidiques quasimonomorphes (BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24 et MONO-27). Les produits PCR sont séparés par électrophorèse capillaire (EC) à l’aide d’un analyseur génétique Applied Biosystems 3500Dx. L’instabilité des microsatellites à 2 ou plusieurs loci mononucléotidiques est interprétée comme MSI-high ; l’instabilité des microsatellites à un seul locus mononucléotidique ou l’absence d’instabilité à aucun des loci testés est interprétée comme microsatellite stable (MSS). Généralement, les échantillons MSI-high présentent une instabilité à tous les loci avec une diminution moyenne de la taille du produit de 5 à 9 bases. La présence de MSI est détectée avec une spécificité analytique d’au moins 99 % et une limite de détection d’au moins 5 %.

Une caractéristique de conception importante du système d’analyse MSI est l’espacement entre les cinq différents loci, qui dépasse généralement le nombre typique de bases décalées (en moyenne 5 à 9 bases) en cas de MSI. La taille la plus longue de l’amplicon PCR est de 154 paires de bases, ce qui est avantageux pour l’analyse des tissus fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE).

Ce test est la norme pour les tests MSI de routine à haut débit, en particulier lorsque d’autres tests moléculaires en aval sont demandés sur le même échantillon d’ADN.

Exigences relatives aux spécimens

Les spécimens acceptables pour le test sont des spécimens de tissus de carcinome colorectal fixés au formol et inclus en paraffine avec un temps de fixation de 6-48 heures.

Volume

1 bloc de paraffine représentatif est préférable. Alternativement, pour les spécimens de résection, un minimum de 5 sections de tissu non colorées (5 µm d’épaisseur) est nécessaire.

Instructions de stockage et d’expédition

Maintenir et expédier les spécimens à température ambiante.

Limitations

Un contenu tumoral insuffisant peut ne pas permettre la détection de l’instabilité MSI : 10% des cellules tumorales sont nécessaires. Le contenu tumoral est évalué avant l’analyse et une macrodissection est effectuée. Des fixatifs autres que le formol ou un temps de fixation prolongé peuvent donner lieu à des résultats inadéquats.

Exigences particulières

Aucune.

Délai d’exécution

Cinq à sept jours ouvrables pour respectivement les lames et les blocs de paraffine.

2. test IdyllaTM MSI (CE-IVD) – Accréditation en cours

Le test IdyllaTM MSI (RUO) effectue la détection de l’instabilité des microsatellites directement à partir de sections de tissus cancéreux humains fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE) en utilisant une réaction PCR suivie d’une analyse de la courbe de fusion à haute résolution sur un instrument IdyllaTM.

Le test effectue la détection de mutations dans 7 loci homopolymères monomorphes pour l’identification des cancers humains présentant une instabilité des microsatellites (ACVR2A, BTBD7, DIDO1, MRE11, RYR3, SEC31A et SULF2). Ces biomarqueurs sont spécifiques aux tumeurs, présentent une fréquence élevée dans les cancers colorectaux et endométriaux et sont stables dans différentes ethnies. En outre, ces biomarqueurs spécifiques aux tumeurs ne nécessitent pas l’analyse d’échantillons de tissus normaux appariés.

Le statut MSI d’un échantillon est déterminé avec l’appel final des 7 biomarqueurs. L’instabilité des microsatellites à 2 ou plusieurs loci mononucléotidiques est interprétée comme MSI-high ; l’instabilité des microsatellites à un seul locus mononucléotidique ou l’absence d’instabilité à l’un des loci testés est interprétée comme stable au niveau des microsatellites (MSS).

Ce test permet de réaliser des tests MSI à faible débit et est idéal pour les tests réflexes ou de secours afin d’obtenir ou de confirmer rapidement un résultat MSI précis.

Exigences en matière de spécimens

Les spécimens acceptables pour le test sont des spécimens de tissu de carcinome colorectal fixés au formol et inclus en paraffine avec un temps de fixation de 6-48 heures.

Volume

1 bloc de paraffine représentatif est préférable. Alternativement, pour les spécimens de résection, un minimum de 2 sections de tissu non colorées (5 µm d’épaisseur ; 50-600mm²) est nécessaire.

Instructions de stockage et d’expédition

Maintenir et expédier les spécimens à température ambiante.

Limitations

Un contenu tumoral insuffisant peut ne pas permettre la détection de l’instabilité MSI : 20% des cellules tumorales sont nécessaires. Le contenu tumoral est évalué avant l’analyse et une macrodissection est effectuée. Des fixatifs autres que le formol ou un temps de fixation prolongé peuvent donner lieu à des résultats inadéquats.

Exigences particulières

Aucune.

Délai d’exécution

Trois à cinq jours ouvrables pour respectivement les lames et les blocs de paraffine.

1. Umar A, Boland CR, Terdiman JP et al. Lignes directrices Bethesda révisées pour le cancer colorectal héréditaire non polyposique (syndrome de Lynch) et l’instabilité des microsatellites. Journal of the National Cancer Institute 2004;96(4):261-268.
2. De la Chapelle A, Hampel H. Pertinence clinique de l’instabilité des microsatellites dans le cancer colorectal. Journal of Clinical Oncology 2010;28(20):3380-3387.
3. Bacher JW, Flanagan LA, Smalley RL et al. Développement d’un test multiplex fluorescent pour la détection des tumeurs MSI-High. Disease Markers 2004 ; 20:237-250.
4. Murphy KM, Zhang S, Geiger T et al. Comparaison du système d’analyse de l’instabilité des microsatellites et du panel Bethesda pour la détermination de l’instabilité des microsatellites dans les cancers colorectaux. Journal of Molecular Diagnostics 2006;8(3):305-311.
5. Anderson S, Bloom KJ, Vallera DU et al. Études de performance analytique multisite d’un test de réaction en chaîne par polymérase en temps réel pour la détection des mutations BRAF V600E dans les spécimens de tissus fixés au formol et emboîtés en paraffine de mélanome malin. Arch pathol lab Med 2012;136(11):1385-1391.
6. Buhard O, Suraweera N, Lectard A et al. Répétitions mononucléotidiques quasimonomorphes pour l’analyse de l’instabilité des microsatellites de haut niveau. Disease Markers 2004;20:251-257.
7. Patil DT, Bronner MP, Portier BP et al. Un panel de cinq marqueurs dans une PCR multiplex détecte avec précision les tumeurs colorectales à instabilité microsatellitaire élevée sans ADN de contrôle. Diagn Mol Pathol 2012 Sep;21(3):127-33.
8. Berg KD, Glaser CL, Thompson RE et al. Détection de l’instabilité des microsatellites par une réaction en chaîne par polymérase multiplex à fluorescence. J Mol Diagn 2000, 2:20-28.
9. De Craene et al. Détection de l’instabilité des microsatellites (MSI) dans les échantillons de cancer colorectal avec un nouvel ensemble de marqueurs très sensibles au moyen du prototype de test IdyllaTM MSI. Journal of Clinical Oncology 2018 ; 36:15.

Mise à jour le 23 mai 2019

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