hi
Mennyire különbözik egymástól az EGFP és a GFP?
és a GFP antitest felismeri az EGFP-t is? ha mindkettőhöz más antitest kell meg tudja mondani a nevüket
köszönöm

Az EGFP (Enhanced GFP) és a GFP néhány aminosavban különbözik, ami miatt az EGFP erősebben fluoreszkál mint a GFP. Egy anti-GFP antitest képes felismerni az EGFP-t is. Én az Abcam által gyártott anti-GFP-t használom az EGFP felismerésére.

Az EGFP a GFP egy mutációja. Fokozott fluoreszcenciával rendelkezik, és a fehérje fő gerjesztési csúcsa 490 nm-re tolódott, az emissziós csúcs pedig 509 nm-en maradt (EGFP).
Az EGFP-t anti-GFP antitesttel kell tudnunk detektálni.

Az EGFP-ről azt is feltételezik, hogy egy kicsit kevésbé mérgező az azt expresszáló sejtekre. Az összes GFP-antitest, amellyel eddig dolgoztam, ugyanúgy azonosítja az EGFP-t, mint a natív GFP-t. A clontech-től származó nagyszerű!

Az EGFP-t egyszerű mutagenezissel RFP-re vagy YFP-re lehet változtatni?

a Cell signaling poliklonális anti-GFP-je jól működik, nincs különbség az eredeti GFP, EGFP vagy mGFP esetében;
CFP és YFP a GFP mutációi, szerintem a megfelelő vektorokkal való klónozás egyszerűbbnek tűnik, mint a GFP; RFP mutációja? – sosem hallottam róla, a DSred (Clontech) jól működik

Én inkább dolgoznék a megfelelő fluoreszcens protien vektorokkal, mint hogy mutáljam őket. Az sokkal egyszerűbb. YFP helyett venusszal dolgoznék ( az YFP módosított változata), RFP esetében pedig DsRed2-vel vagy mCherry-vel vagy mStrawberry-vel (Tsien laborja)- a kísérletektől függően.

dsRed és a többi vörös fluoreszcens fehérje egészen más, mint a GFP-k, így a GFP elleni antitestek nem fognak működni velük. A CFP, YFP és eGFP változatok mind kis mértékben eltérnek a GFP-től, és a GFP antitestekkel kimutathatóak lesznek.

Azt hallottam, hogy ezek egy pontmutáció miatt különböznek. Fenilalaninból leucin lett, ha jól emlékszem.