ABSTRACT

A génexpresszió elemzése gyakori kutatási eszköz a génexpressziót szabályozó hálózatok, az ismeretlen funkciójú gének szerepének és a szervezetek környezet által kiváltott válaszainak tanulmányozására. A génexpresszió elemzésére használt analitikai eszközök többsége pontos cDNS-szintézisre és mennyiségi meghatározásra támaszkodik a reprodukálható és számszerűsíthető eredmények elérése érdekében. Eddig a cDNS izolálására és tisztítására szolgáló legtöbb kereskedelmi készlet kettősszálú molekulákat céloz meg, amelyek nem reprezentálják pontosan a transzkriptek mennyiségét. Ebben a jelentésben egy egyszerű és gyors módszert mutatunk be az egyszálú cDNS tisztítására, amely nagy tisztaságot és hozamot mutat. Ez a módszer a cDNS-szintézist követő RNáz H-val és RNáz A-val történő kezelésen, majd szilika spin-oszlopokon történő elválasztáson és etanolos kicsapáson alapul. Ezenkívül módszerünkkel elkerülhető a DNáz I használata a genomi DNS eltávolítására az RNS-készítményekből, ami javítja a cDNS-hozamot. Esettanulmányként módszerünk hasznosnak bizonyult a Sporothrix schenckii patogén gombából származó egyszálú cDNS tisztításában.