hi
come sono diversi EGFP e GFP tra loro?
e l’anticorpo GFP riconosce anche EGFP? se entrambi richiedono un anticorpo diverso può dirmi i loro nomi
grazie

L’EGFP (Enhanced GFP) e GFP differiscono per alcuni aminoacidi che rendono EGFP fluorescente più forte di GFP. Un anticorpo anti-GFP può riconoscere anche EGFP. Io uso un anti-GFP di Abcam per riconoscere EGFP.

EGFP è un mutante di GFP. Ha una maggiore fluorescenza e il picco di eccitazione principale della proteina è stato spostato a 490 nm con il picco di emissione mantenuto a 509 nm (EGFP).
U dovrebbe essere in grado di rilevare EGFP con un anticorpo anti-GFP.

EGFP è anche pensato per essere un po’ meno tossico per le cellule che lo esprimono. Tutti gli anticorpi GFP con cui ho lavorato identificano EGFP così come la GFP nativa. Quello di clontech è ottimo!

È possibile cambiare EGFP in RFP o YFP per semplice mutagenesi?

l’anti-GFP policlonale di Cell signaling funziona bene, nessuna differenza per GFP originale, EGFP o mGFP;
CFP e YFP sono mutazioni di GFP, penso che la clonazione con i vettori corrispondenti sembra essere più semplice che mutare GFP; RFP? – mai sentito, DSred (Clontech) funziona bene

Preferisco lavorare con i rispettivi vettori di protieni fluorescenti piuttosto che mutarli. È molto più facile. Invece di YFP, lavorerei con venus (una versione modificata di YFP) e per RFP, lavorerei con DsRed2 o mCherry o mStrawberry (laboratorio di Tsien) – a seconda degli esperimenti.

dsRed e le altre proteine fluorescenti rosse sono abbastanza distinte dalle GFP, quindi gli anticorpi per GFP non funzioneranno con loro. Le varianti CFP, YFP e eGFP sono tutte piccole modifiche di GFP e saranno rilevate dagli anticorpi GFP.

Ho sentito che queste sono diverse a causa di una mutazione puntiforme. Da fenilalanina a leucina se ricordo bene.