Presentato a: ASRM 2017 – San Antonio, Texas
Obiettivo: Per determinare la presenza e lo stato di ploidia degli embrioni utilizzabili derivati da ovociti che non mostrano due pronuclei (0PN) al momento della valutazione della fecondazione.
Design: Studio retrospettivo in un laboratorio privato di fecondazione in vitro.
Materiali e metodi: Un totale di 3.370 blastocisti sono state identificate come morfologicamente adatte al trasferimento di embrioni freschi, alla vitrificazione o alla biopsia del tropoctoderma per il test genetico dello stato ploidico seguito dalla vitrificazione (cioè blastocisti utilizzabili). Le blastocisti utilizzabili sono state ottenute il 5°, 6° o 7° giorno. Gli ovociti maturi sono stati fecondati con ICSI e la valutazione pronucleare è stata eseguita e registrata utilizzando un microscopio invertito 16-18 ore dopo l’inseminazione. Gli embrioni con 2 pronuclei sono stati separati da tutti gli altri embrioni derivanti da 0PN, 1PN, 3PN e ≥4PN zigoti. Gli embrioni sono stati coltivati in gruppo in un singolo terreno di coltura continuo (Irvine Scientific). Il numero di copie cromosomiche è stato valutato per le blastocisti idonee con la piattaforma Illumina MiSeq. Gli embrioni segnalati come normali non avevano alcuna aberrazione rilevabile del numero di copie, con una soglia di ≤30%. Una soglia di ≥50% è stata definita per qualsiasi aumento/perdita di cromosomi interi per i cromosomi 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, 17, 19 e/o 22. Una soglia di ≥30% è stata definita per i cromosomi 6, 7, 8, 9, 11, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 21, X, Y e qualsiasi duplicazione e/o delezione segmentale per qualsiasi cromosoma. Un risultato di anomalia complessa è stato definito come una combinazione di tre o più anomalie del numero di copie consistenti in trisomia e/o monosomia.
Risultati: Nell’arco di 18 mesi, 830 prelievi di ovociti freschi hanno prodotto 7.258 zigoti con due pronuclei aploidi (2PN). Questi zigoti 2PN si sono sviluppati in 3.349 blastocisti utilizzabili (46%). Il 2,9% dei prelievi di ovociti aveva blastocisti utilizzabili derivate da ovociti che non mostravano pronuclei (0PN) al momento della valutazione della fecondazione. Sono state vetrificate 24 blastocisti utilizzabili (da zigoti 0PN) da 24 pazienti diverse. 14 (58%) di queste blastocisti non sono state testate per la conferma del numero di copie cromosomiche. 10 blastocisti derivate da zigoti 0PN sono state esaminate tramite PGS. Quattro embrioni (44%) sono stati riportati come normali, mentre due embrioni sono stati riportati come anormali XO e tre embrioni come anormali complessi XY. Nessun trasferimento di una blasotocisti utilizzabile derivata da uno 0PN si è ancora verificato.
Tabella 1: Stato di ploidia delle blastocisti 0PN utilizzabili
| Embrione | Diagnosi del trofectoderma |
| 1 | Complesso +5, +8, +16; XY |
| 2 | Anormale; XO |
| 3 | Complesso -2, -3, +6, -8, -12; XY |
| 4 | Complesso +3, -5, +19, -15, -16, -17, -18. -19, +20, +21; XO |
| 5 | Anormale; XO |
| 6 | Normale XX |
| 7 | Normale XX |
| 8 | Normale XY |
| 9 | Normale XY |
| 10-24 | Sconosciuto |
Conclusione: I nostri risultati dimostrano che le blastocisti utilizzabili derivate da zigoti con formazione pronucleare anormale (0PN) possono svilupparsi in un embrione cromosomicamente normale. Tuttavia, questi embrioni possono anche avere un’alta possibilità di guadagni o perdite cromosomiche multiple. Questi risultati sono simili a precedenti rapporti di potenziale di sviluppo, analisi cromosomica e gravidanze in corso da zigoti contenenti pronuclei anomali1-3. I pazienti dovrebbero essere consigliati per quanto riguarda le anomalie cromosomiche associate con blastocisti utilizzabili non testati derivati da zigoti atipici. Ulteriori indagini sullo stato di ploidia delle blastocisti utilizzabili derivate da embrioni zigotici anormali con un singolo pronucleo (1PN), tre pronuclei (3PN) o superiore (≥4PN) possono fornire ulteriori informazioni riguardo al valore di ritenzione degli zigoti pronucleari anormali.