ImmunohistochemistryEdit

組織切片の免疫組織化学またはIHC染色（または細胞の染色である免疫細胞化学）は、おそらく最も一般的に適用されている免疫染色技術です。 最初のIHC染色は蛍光色素を用いたものであったが（免疫蛍光法を参照）、現在ではペルオキシダーゼ（免疫ペルオキシダーゼ染色を参照）やアルカリホスファターゼなどの酵素を用いた非蛍光法も用いられている。 これらの酵素は、光顕微鏡で容易に検出できる色のついた生成物を与える反応を触媒することができる。 また、放射性元素を標識として使用し、オートラジオグラフィーを用いて免疫反応を可視化することも可能である。 不適切な固定や長時間の固定は、抗体結合能を著しく低下させる可能性がある。 ホルマリン固定したパラフィン包埋組織切片では、多くの抗原の発現に成功することができる。 しかし、一部の抗原は中程度の量のアルデヒド固定にさえ耐えられない。 このような条件下では、組織を液体窒素で急速凍結し、クリオスタットで切断する必要がある。 凍結切片の欠点は、形態が悪い、高倍率での解像度が悪い、パラフィン切片の上から切るのが難しい、冷凍保存が必要なことである。 一方、ビブラトーム切片は、抗原性を破壊する可能性のある有機溶媒や高熱による処理、凍結融解による組織の破壊を行う必要がありません。

多くの抗原の検出は、固定によって形成されたタンパク質の架橋の一部を破壊して隠れた抗原部位を発見する作用のある抗原賦活法によって劇的に改善することが可能である。

IHC染色における主な困難の一つは、特異的あるいは非特異的なバックグラウンドを克服することです。 固定方法と時間の最適化、ブロッキング剤による前処理、高塩分での抗体のインキュベーション、抗体洗浄後の緩衝液と洗浄時間の最適化はすべて、高品質の免疫染色を得るために重要です。 さらに、染色の陽性対照と陰性対照の存在は特異性の判断に不可欠である。

Flow cytometryEdit

フローサイトメーターは、1つ以上の特定のタンパク質を発現している細胞の直接分析に使用することができる。

フローサイトメトリーは、IHCと比較して、サイズや粒度によって異なる細胞集団を定義する能力、死細胞を排除する能力、感度の向上、複数の抗原を同時に測定するマルチカラー分析などの利点を持っています。 しかし、フローサイトメトリーでは、極めて稀な細胞集団の検出には限界があり、また、組織切片がない場合には、構造的な関係性が失われることがある。 フローサイトメトリーは、フローサイトメーターの購入に伴う資本コストも高い。

Western blottingEdit

Western blottingは、細胞や組織から抽出した抽出液から、精製工程の前または後に、特定のタンパク質を検出することができる。 タンパク質は一般にゲル電気泳動でサイズごとに分離された後、ドライ、セミドライ、ウェットブロッティング法で合成膜に移される。 この膜は、免疫組織化学に類似した方法で抗体を用いてプローブされるが、固定化の必要はない。

Western blottingは、抽出物間のタンパク質レベルを半定量的に比較するために使用できるルーチン分子生物学的手法である。

Enzyme-linked immunosorbent assay編集部

enzyme-linked immunosorbent assayまたはELISAは、血漿、血清、細胞/組織抽出物からタンパク質濃度をマルチウェルプレート形式（通常96ウェル/プレート）で定量的または半定量的に測定する診断法である。 大まかには、溶液中のタンパク質をELISAプレートに吸着させる。 目的のタンパク質に特異的な抗体を用いて、プレートをプローブします。 ブロッキングと洗浄の方法を最適化することによりバックグラウンドを最小化し（IHCと同様）、陽性対照と陰性対照の存在により特異性を確保する。

Immuno-Electron microscopyEdit

電子顕微鏡法（EM）は組織や細胞の微細構造を研究するために使用することができる。 免疫電子顕微鏡は、超薄切片の組織切片から特定のタンパク質を検出することができます。 また、重金属粒子（金など）で標識した抗体を透過型電子顕微鏡で直接可視化することができます。 免疫電子顕微鏡は、タンパク質の細胞内局在を検出するのに有効であるが、技術的に難しく、高価であり、組織の固定や処理方法を厳密に最適化する必要がある。 生体内のタンパク質をビオチン化することで、抗体染色と固定方法の不適合による問題を軽減し、細胞の形態をよりよく保存することが提案された

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