臨床的意義

マイクロサテライト不安定性（MSI）は、ミスマッチ修復（MMR）システムが欠損した腫瘍細胞における短い反復DNA配列の欠失／挿入の系統的蓄積によりもたらされるものです。 MSIは全大腸がんの約15％に認められ、MMR遺伝子の生殖細胞変異に起因する遺伝性非ポリポーシス大腸がん（HNPCC、リンチ症候群）患者の同定に臨床的に有用である。 また、MSIの状態は、特定の化学療法に対する癌の反応性や耐性を予測することができる。

MSI解析を標準化する試みとして、1997年の米国国立がん研究所（NCI）のワークショップでは、MSIの検出に5つのマイクロサテライトマーカーの参照パネルを推奨し、その結果に基づきMSI分類ガイドラインを制定した。 ベセスダ・パネルと呼ばれる参照パネルは、2つのモノヌクレオチド遺伝子座（Big Adenine TractまたはBAT-25とBAT-26）と3つのジヌクレオチド遺伝子座（D2S123、D5S346とD17S250）から構成されています。 ベセスダ・パネルを用い、これらの遺伝子座のうち2つ以上に不安定性がある癌をMSI-high（MSI-H）と解釈し、5つの遺伝子座のいずれにも不安定性がない癌をマイクロサテライト安定（MSS）とした。 NCIワークショップでは、ジヌクレオチド反復配列が含まれているため、オリジナルのベセスダパネルの感度と特異性が制限される可能性があることが認識された。 1139>

MSI Analysis System (Research Use Only kit, Version 1.2, Promega Corporation).

The MSI Analysis System is a multiplex, fluorescent PCR-based assay for detection of microsatellite instability.準単型の一核酸リピートパネルはMSIハイガンの検出のために十分に感度および特異性があり、検査する腫瘍の正常マッチングDNAが必要ない可能性が指摘されています (1-8).

MSI Analysis Systemはマイクロサテライトの不安定の検出のための多重蛍光PCRベースのアッセイです。 MSI Analysis Systemには、5つの準単型モノヌクレオチドリピートマーカー（BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24 and MONO-27）を共増幅する蛍光標識プライマーが含まれています。 PCR産物はApplied Biosystems 3500Dx Genetic Analyzerを用いたキャピラリー電気泳動（CE）により分離される。 2つ以上のモノヌクレオチド遺伝子座でマイクロサテライトが不安定な場合はMSI-highと解釈し、1つのモノヌクレオチド遺伝子座でマイクロサテライトが不安定、または検査したどの遺伝子座でも不安定でない場合はマイクロサテライト安定（MSS）と解釈される。 通常、MSI-highのサンプルは、すべての遺伝子座で不安定性を示し、プロダクトサイズが平均で5～9塩基減少する。 MSIの存在は、少なくとも99%の分析特異性と少なくとも5%の検出限界で検出されます。

MSI Analysis Systemの重要な設計上の特徴は、5つの異なる遺伝子座の間の間隔であり、一般にMSIが存在する場合にシフトする塩基数（平均5から9塩基）を超えています。 また、最長のPCRアンプリコンサイズは154塩基対であり、ホルマリン固定パラフィン包埋組織（FFPE）の解析に有利なサイズとなっています。

このアッセイは、特に同じDNAサンプルで他のダウンストリーム分子アッセイが要求される場合、ハイスループットのルーチンMSI検査の標準となるものである。

検体要件

本アッセイに使用できる検体は、固定時間6～48時間のホルマリン固定、パラフィン包埋大腸がん組織検体です。

容積

1代表パラフィンブロックが好ましいです。

保存と出荷に関する注意事項

検体は常温で保存、出荷してください。

制限事項

腫瘍量が十分でないとMSI不安定性の検出ができない場合があります：腫瘍細胞の10％が必要です。 腫瘍の含有量は解析前に評価され、マクロダイセクションが行われる。

特別な要件

なし

納期

スライドおよびパラフィンブロックはそれぞれ5～7営業日です。

2.IdyllaTM MSI Assay (CE-IVD) – Accreditation pending

IdyllaTM MSI Assay (RUO) は、ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）のヒトがん組織切片から直接マイクロサテライト不安定性を検出するためのPCR反応と、IdyllaTM 装置による高解像度溶融曲線解析を実施します。

本アッセイは、マイクロサテライト不安定性を有するヒトのがんを同定するために、7つの単形ホモポリマー遺伝子座（ACVR2A、BTBD7、DIDO1、MRE11、RYR3、SEC31AおよびSULF2）における変異の検出を行うものである。 これらのバイオマーカーは腫瘍特異的であり、大腸がんや子宮内膜がんで高い頻度を示し、異なる民族間で安定であることが分かっています。 さらに、これらの腫瘍特異的バイオマーカーは、ペアの正常組織サンプルの分析を必要としません。

サンプルのMSI状態は、7つのバイオマーカーすべての最終判定で決定されます。 2つ以上のモノヌクレオチド遺伝子座におけるマイクロサテライト不安定性はMSI-highと解釈され、単一のモノヌクレオチド遺伝子座におけるマイクロサテライト不安定性またはテストした遺伝子座のいずれにおいても不安定性がない場合はマイクロサテライト安定（MSS）と解釈されます。

検体要件

本測定に使用できる検体は、固定時間6～48時間のホルマリン固定、パラフィン包埋大腸がん組織検体で、

容積

1つの代表パラフィンブロックが望ましい。

保管・発送上の注意

検体は常温で保管・発送してください。

制限事項

不十分な腫瘍量ではMSI不安定性の検出ができない場合があります：腫瘍細胞の20%が必要です。 腫瘍の含有量は解析前に評価され、マクロダイセクションが行われる。

特別な要件

なし

納期

スライドおよびパラフィンブロックはそれぞれ3～5営業日です。

1. Umar A, Boland CR, Terdiman JP et al. Hereditary Nonpolyposis Colorectal cancer (Lynch Syndrome) and Microsatellite Instabilityに関する改訂ベセスダガイドライン(Revised Bethesda Guidelines for Hereditary Nonpolyposis Colorectal cancer and Microsatellite Instability)。 2004;96(4):261-268.
2. De la Chapelle A, Hampel H. Clinical Relevance of Microsatellite Instability in Colorectal Cancer.The Journal of the National Cancer Institute 2004;96(4):261-268.De la Chapelle A, Hampel H.大腸がんにおけるマイクロサテライト不安定性の臨床的意義。
3. Bacher JW, Flanagan LA, Smalley RL et al. MSI-High tumors の検出のための蛍光マルチプレックスアッセイの開発。
4. Murphy KM, Zhang S, Geiger T et al. Microsatellite Instability Analysis SystemとBethesda Panel for the Determination of Microsatellite Instability in Colorectal Cancersの比較. また、このような研究成果を踏まえて、「BRAF V600E変異を検出するためのリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応アッセイのマルチサイト分析性能に関する研究」を開始しました。 Arch pathol lab Med 2012;136(11):1385-1391.
5. Buhard O, Suraweera N, Lectard A et al. マイクロサテライト不安定性解析のための準単型モノヌクレオチドリピート。
6. Patil DT, Bronner MP, Portier BP et al. multiplex PCRにおける5つのマーカーパネルは、コントロールDNAなしでマイクロサテライト不安定性の高い大腸腫瘍を正確に検出することができる。 J Mol Diagn 2000, 2:20-28.
7. De Craene et al. Detection of microsatellite instability (MSI) in colorectal cancer samples with a novel set of highly sensitive markers by by the IdyllaTM MSI Test prototype.大腸がん試料におけるマイクロサテライト不安定性の検出。 Journal of Clinical Oncology 2018; 36:15.

Updated on 23 May 2019

に掲載されました。