Presented at: ASRM 2017 – San Antonio, Texas
Cel: Określenie występowania i statusu ploidalności zarodków użytecznych pochodzących z oocytów niewykazujących dwóch pronuklei (0PN) w momencie oceny zapłodnienia.
Projekt: Badanie retrospektywne w prywatnym laboratorium zapłodnienia in vitro.
Materiały i metody: Łącznie zidentyfikowano 3370 blastocyst, które morfologicznie nadawały się do transferu świeżych zarodków, witryfikacji lub biopsji trophektodermy w celu genetycznego badania statusu ploidalności, a następnie witryfikacji (tj. blastocysty użytkowe). Nadające się do użytku blastocysty uzyskano w dniu 5, 6 lub 7. Dojrzałe oocyty były zapładniane metodą ICSI, a ocena pronuklearna była przeprowadzana i rejestrowana przy użyciu mikroskopu odwróconego 16-18 h po zapłodnieniu. Zarodki z 2 pronukleami oddzielono od wszystkich innych zarodków powstałych z zygot 0PN, 1PN, 3PN i ≥4PN. Zarodki były hodowane grupowo w ciągłej pojedynczej pożywce hodowlanej (Irvine Scientific). Liczbę kopii chromosomalnych oceniano dla odpowiednich blastocyst za pomocą platformy MiSeq firmy Illumina. Zarodki uznane za prawidłowe nie miały wykrywalnych aberracji liczby kopii, przy progu ≤30%. Próg ≥50% został zdefiniowany dla jakiegokolwiek wzmocnienia/utraty całego chromosomu dla chromosomów 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, 17, 19, i/lub 22. Próg ≥30% został określony dla chromosomów 6, 7, 8, 9, 11, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 21, X, Y oraz wszelkich odcinkowych duplikacji i/lub delecji dla któregokolwiek z tych chromosomów. Złożony wynik nieprawidłowości został zdefiniowany jako kombinacja trzech lub więcej nieprawidłowości liczby kopii składających się z trisomii i/lub monosomii.
Wyniki: W ciągu 18 miesięcy, 830 pobrań świeżych oocytów zaowocowało 7,258 zygotami z dwoma haploidalnymi pronuklei (2PN). Te 2PN zygoty rozwinęły się w 349 nadających się do użytku blastocyst (46%). 2,9% pobrań oocytów miało nadające się do użytku blastocysty pochodzące z oocytów nie wykazujących pronuklei (0PN) w czasie oceny zapłodnienia. 24 nadające się do użytku blastocysty (z zygoty 0PN) od 24 różnych pacjentów zostały zeszklone. 14 (58%) z tych blastocyst nie zostało przebadanych w celu potwierdzenia liczby kopii chromosomalnych. 10 blastocyst pochodzących z zygot 0PN zostało przebadanych metodą PGS. Cztery embriony (44%) uznano za prawidłowe, dwa za nieprawidłowe XO, a trzy za złożone nieprawidłowe XY. Nie doszło jeszcze do przeniesienia użytecznej blasotocysty pochodzącej z 0PN.
Tabela 1: Ploidy Status of Usable 0PN Blastocysts
| Embryo | Trophectoderm Diagnosis |
| 1 | Complex +5, +8, +16; XY |
| 2 | Niezwykłe; XO |
| 3 | Kompleks -2, -3, +6, -8, -12; XY |
| 4 | Kompleks +3, -5, +19, -15, -16, -17, -18. -19, +20, +21; XO |
| 5 | Nienormalny; XO |
| 6 | Normalny XX |
| 7 | Normalny XX |
| 8 | Normalny XY |
| 9 | Normalny XY |
| 10-.24 | Nieznany |
Podsumowanie: Nasze wyniki dowodzą, że użytkowe blastocysty pochodzące z zygot z nieprawidłowym tworzeniem pronuklearnym (0PN) mogą rozwinąć się w chromosomalnie prawidłowy zarodek. Jednakże, zarodki te mogą mieć również wysokie prawdopodobieństwo wystąpienia licznych chromosomalnych zysków lub strat. Wyniki te są podobne do wcześniejszych doniesień o potencjale rozwojowym, analizie chromosomalnej i ciążach trwających od zygot zawierających nieprawidłowe pronuklei1-3. Pacjenci powinni być poinformowani o nieprawidłowościach chromosomalnych związanych z niezbadanymi blastocystami pochodzącymi z atypowych zygot. Dalsze badania statusu ploidalności blastocyst pochodzących z nieprawidłowych zarodków zygotycznych z pojedynczym pronukleusem (1PN), trzema pronukleusami (3PN) lub wyższym (≥4PN) mogą dostarczyć dalszych informacji dotyczących wartości retencyjnej nieprawidłowych zygot pronuklearnych.
.