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Descrição
O pó liofilizado de poli DYKDDDK (FLAG) Peptídeo foi sintetizado por 23 resíduos de aminoácidos com peso molecular 2,864 Da. O motivo Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp é repetido três vezes no peptídeo. Oito aminoácidos no terminal C compõem a clássica sequência FLAG (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
Propriedades
Branco
Pó
Pó liofilizado
95.33 % (o último lote) Pó Liofilizado de Peptídeo Liofilizado de Poli FLAG
(A concentração de trabalho recomendada é 200-400 μg/mL para eluir proteínas de fusão FLAG dos grânulos Anti-DYKDDDDK (FLAG).
Gelo azul
2-8°C
Aplicação
Para utilização na eluição competitiva de proteínas de fusão DYKDDDK (FLAG) do anticorpo ANTI-FLAGmonoclonal em solução ou ligado à agarose nos grânulos Anti-DYKDDDK (FLAG).
Atenção
1. Leia atentamente o Manual do Utilizador antes da primeira utilização;
2. Evite o congelamento, secagem e centrifugação a alta velocidade durante a utilização e armazenamento dos grânulos;
3. Este produto é para R&D uso apenas, não para drogas, uso doméstico, ou outros usos. Favor consultar a Ficha de Dados de Segurança do Material para informações sobre perigos e práticas de manuseio seguro.
Procedimento
Eluição Peptídica de DYKDDDDK(FLAG) Proteína de Fusão de Contas Anti-DYKDDDDK(FLAG)
1. Suspender completamente o Gel de Afinidade Anti-Flag no frasco, para uma suspensão uniforme da resina. Transferir rapidamente 10μl da suspensão do gel (cerca de 5μl do volume de gel embalado) para um tubo fresco.
2. Adicione 0.6 mL de TBS. Suspenda completamente o Gel Anti-Flag Affinity por pipetagem. Centrifugue a resina a 5000 rpm durante 30 segundos e retire cuidadosamente o sobrenadante. Certifique-se de remover todo o tampão de lavagem sem descartar a resina. Repita 3-4 vezes.
3. Adicione 500 μL de extractos perplasmáticos celulares à resina lavada.
4. Agitar suavemente as amostras durante 2 horas a 4°C.
5. Centrifugar a resina durante 30 segundos a 5000 rpm. Transferir os sobrenadantes para um tubo fresco.
6. Lavar a resina com 0,5mL TBS até ao OD280 do sobrenadante reads＜0.05.
7. Eluição da Proteína de Fusão DYKDDDK (FLAG) por competição com Peptídeo de Poli DYKDDDDK (FLAG). Eluir o DYKDDDK(FLAG) Fusion Protein por eluição competitiva com cinco alíquotas de volume de uma coluna de uma solução contendo 200-400 ug/mL de Poli DYKDDDDK(FLAG) Peptídeo em TBS.
8. Reciclagem das contas Anti-DYKDDDK(FLAG) Peptidemay não eluir todas as contas DYKDDDK(FLAG) Proteína de fusão ligada às contas Anti-DYKDDDDK(FLAG). Recomenda-se que os grânulos de Anti-DYKDDDK(FLAG) sejam regenerados imediatamente após o uso, por lavagem com três alíquotas de 5 mL de HCl glicina 0,1 M, pH 3,5. O gel deve ser re-equilibrado imediatamente em TBS até que o efluente esteja em pH neutro.
Nota: Não deixar os grânulos de Anti-DYKDDDK(FLAG) em glicina HCl por mais de 20 minutos.
9. Guardar as contas de Anti-DYKDDDK(FLAG)
Lave as contas de Anti-DYKDDDK(FLAG) três vezes com 5 mL de 50% de glicerol com 10mM de fosfato de sódio, 150 mM de cloreto de sódio, pH 7,4, contendo 0.02% (p/v) de azida sódica. depois adicionar mais 5 mL de 50% de glicerol com 10 mM de fosfato de sódio, 150 mM de cloreto de sódio, pH 7,4, contendo 0,02% (p/v) de azida sódica e armazenar a -20°C sem drenar.
Armazenamento & estabilidade
Armazenar o produto a 2-8°C.
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Pó liofilizado de Peptídeo FLAG Poly FLAG