ABSTRACT

Análise da expressão gênica é uma ferramenta de pesquisa comum para estudar redes de controle da expressão gênica, o papel dos genes com função desconhecida, e as respostas ambientalmente induzidas dos organismos. A maioria das ferramentas analíticas utilizadas para analisar a expressão gênica se baseia na síntese e quantificação precisas de cDNA para obter resultados reprodutíveis e quantificáveis. Até o momento, a maioria dos kits comerciais de isolamento e purificação de cDNA visa moléculas de dupla cadeia, que não representam com precisão a abundância de transcrições. No presente relatório, fornecemos um método simples e rápido de purificação de cDNA de corda única, exibindo alta pureza e rendimento. Este método é baseado no tratamento com RNase H e RNase A após a síntese do cDNA, seguido da separação em colunas de spin-colunas de sílica e precipitação de etanol. Além disso, nosso método evita o uso de DNase I para eliminar o DNA genômico das preparações de RNA, o que melhora o rendimento do cDNA. Como um relato de caso, nosso método provou ser útil na purificação do cDNA de cadeia única do fungo patogênico Sporothrix schenckii.