Abstract

Anterior: As translocações robertsonianas acarretam riscos reprodutivos que dependem dos cromossomas envolvidos e do sexo do portador. Descrevemos cinco casais que se apresentaram para o diagnóstico genético pré-implantatório (DGP). MÉTODOS: O PGD foi realizado através de biópsia do embrião em fase de clivagem (dia 3), hibridação in-situ fluorescente (FISH) com sondas específicas de locus e transferência de embriões no dia 4. RESULTADOS: O casal A (45,XX,der(14;21)(q10;q10)) teve duas gestações anteriores, uma com trissomia de translocação 21. Uma gravidez bem sucedida com um único botão seguiu dois ciclos de DGP. O casal B (45,XX,der(13;14)(q10;q10)) teve quatro abortos espontâneos, dois com trissomia de translocação 14. Um ciclo de DGP resultou em trigêmeos. O casal C (45,XX,der(13;14)(q10;q10)) teve quatro anos de infertilidade; dois ciclos não tiveram sucesso. O casal D (45,XY,der(13;14)(q10;q10)) apresentou oligozoospermia. Uma gravidez de uma só tonelada seguiu dois ciclos de DGP. O casal E (45,XY,der(13;14)(q10;q10)) teve uma contagem de espermatozóides dentro da faixa de normalidade e baixos níveis de espermatozóides aneuploides. O DGP não foi, portanto, recomendado. Não foram encontradas evidências de alta incidência de embriões com complementos cromossômicos caóticos ou em mosaico. CONCLUSÕES: Para casais férteis, a avaliação cuidadosa do risco e o aconselhamento genético devem preceder a consideração para o DGP. Quando casais de translocação necessitam de concepção assistida para subfertilidade, o DGP é uma tela valiosa para o desequilíbrio, mesmo quando o risco de anormalidade cromossômica viável é baixo.

Introdução

Translocações robertônicas (fusão cêntrica de dois cromossomos acrocêntricos) ocorrem com uma prevalência de ∼1 em 1000 na população geral (Gardner e Sutherland, 1996). De longe as mais comuns são as formas não-homológicas, ou seja, aquelas que envolvem dois cromossomas acrocêntricos diferentes – dois cromossomas diferentes do grupo D (cromossomas 13, 14 e 15), dois cromossomas diferentes do grupo G (21 e 22), ou um cromossoma do grupo D e um cromossoma do grupo G. Na meiose, esses rearranjos formam trivalentes, cuja segregação pode resultar em gametas nulas ou desômicas para um dos cromossomos envolvidos no rearranjo e, consequentemente, em um zigoto com trissomia ou monossomia para um dos cromossomos envolvidos. Zigotos com monossomia não são compatíveis com a vida e espera-se que a maioria dos conceitos de trissomia de translocação resulte em perda no primeiro trimestre ou antes; entretanto, alguns sobrevivem além do segundo trimestre e a termo.

A translocação Robertsonian mais comum é entre os cromossomos 13 e 14. Esta translocação D/D constitui ~75% de todos os Robertsonians (Gardner e Sutherland, 1996). O resultado potencialmente desequilibrado do cromossomo vivo é a trissomia de translocação 13 (síndrome de Patau); há um risco empírico de ocorrência no segundo trimestre do diagnóstico pré-natal de <0,4% (Boué e Gallano, 1984; Gardner e Sutherland, 1996). Há também potencial para disomia uniparental (UPD) para o cromossomo 14 após o resgate da trissomia, com risco estimado de ~0,1-0,5% (Gardner e Sutherland, 1996). Espera-se que a trissomia de translocação do cromossomo 14 resulte em perda no primeiro trimestre. Para os portadores de der(13;14), o risco global de aborto espontâneo não deve ser significativamente diferente do risco de fundo de 15% (Harris et al., 1979) (até dois abortos); entretanto, alguns indivíduos com der(13;14) apresentam infertilidade ou abortos espontâneos recorrentes. Outros D/D Robertsonians são muito menos frequentes e riscos específicos não foram derivados; entretanto, der(13;15) e der(14;15) podem ter riscos similares ao der(13;14) (Gardner e Sutherland, 1996).

O mais comum Robertsonian após o der(13;14) é o der(14;21). O resultado potencialmente desequilibrado deste D/G Robertsonian é a trissomia do cromossomo 21 de translocação, resultando na síndrome de Down; para as portadoras, o risco empírico de ocorrência no segundo trimestre do pré-natal é de 15%, com um risco de 10% de trissomia do cromossomo 21 de nascimento vivo mais um pequeno risco de UPD 14, como antes. Para os portadores masculinos, o risco de trissomia do cromossomo 21 translocação no segundo trimestre é <0,5% (Boué e Gallano, 1984; Gardner e Sutherland, 1996), possivelmente devido à desvantagem seletiva para os espermatozóides portadores de um homólogo extra do cromossomo 21.

Outros D/G Robertsonians que envolvem o cromossomo 21 podem ter riscos reprodutivos similares aos do der(14;21); aqueles que envolvem o cromossomo 22 têm um risco menor, uma vez que a trissomia do cromossomo 22 tem potencial muito limitado para ser viável.

O diagnóstico pré-natal tem estado disponível para portadores de translocações de Robertsonian por muitos anos. Entretanto, a interrupção da gravidez em caso de trissomia do cromossomo 22 não é uma opção aceitável para alguns casais e, para portadores dessas translocações, há um interesse crescente no diagnóstico genético pré-implantatório (DGP) em conjunto com a concepção assistida usando FIV ou injeção intracitoplasmática de esperma (ICSI).

O DGP é agora oferecido por cerca de 40 centros em todo o mundo, incluindo cinco no Reino Unido. A hibridização in-situ da fluorescência (FISH) é utilizada para a determinação do sexo em condições ligadas ao X (Handyside e Delhanty, 1997; Kuo et al., 1998; Staessen et al., 1999; Pettigrew et al., 2000) e para investigar o estado de embriões de casais em que um dos parceiros carrega um rearranjo cromossómico. PGD para rearranjos cromossômicos começou com o trabalho de sondas específicas para cada translocação recíproca ou Robertsonian (Munné et al., 1998a), o que permitiu a discriminação entre embriões normais e aqueles que carregam a forma equilibrada da translocação. Uma abordagem mais geral das translocações recíprocas tornou-se possível (Handyside et al., 1998; Scriven et al., 1998) com o desenvolvimento de sondas subteloméricas específicas para cada cromossoma (National Institutes of Health and Institute of Molecular Medicine Collaboration, 1996). Esta abordagem levou a gravidezes bem sucedidas para portadores de translocação recíproca (Van Assche et al., 1999; Munné et al., 2000; Scriven et al., 2000) mas não permite a discriminação entre embriões “normais” e “equilibrados”. Foi relatada uma taxa de gravidez de 19% por transferência de embriões para a rearranjo cromossômico PGD (ESHRE PGD Consortium Steering Committee, 2000).

PGD para translocações Robertsonian foi realizada com sucesso por vários centros em todo o mundo, tanto por biópsia de corpo polar (Munné et al.., 1998a,b), e por biópsia de blastômeros, onde um ou dois blastômeros são retirados do embrião na fase de 6-10 células (dia 3 pós-fertilização) (Escudero et al., 2000; Munné et al., 2000). Entretanto, alguns centros relataram altos níveis de mosaicismo e caos em embriões de portadores de translocação Robertsonian (Conn et al., 1998, 1999) resultando em taxas reduzidas de sucesso de gravidez. Estas observações levaram à sugestão de que as translocações Robertsonian podem, de alguma forma, predispor à má segregação e/ou falta de desenvolvimento embrionário normal.

No nosso próprio centro, avaliamos um número de casais Robertsonian e realizamos até à data sete ciclos para quatro casais, resultando em três gravidezes e quatro bebés nascidos. Este trabalho apresenta a nossa experiência de casais Robertsonian explorando a possibilidade de PGD e os detalhes dos ciclos realizados, incluindo dados que indicam que relatórios anteriores de altos níveis de embriões anormais nestes portadores de translocação podem ser, pelo menos em parte, artefactuais.

Materiais e métodos

Cariótipo e trabalho citogenético para PGD

Cariótipo através de análise cromossómica em metafase G de linfócitos do sangue periférico cultivados foi realizado utilizando técnicas padrão. Estudos de FISH em núcleos de metáfase e interfase utilizaram as combinações de sondas e o método descrito abaixo. Ambos os parceiros foram avaliados para assegurar que as sondas foram hibridizadas como esperado; 10 propagações em metafase foram examinadas de cada parceiro e 200 núcleos interfásicos foram pontuados. Os padrões de sinal das sondas nos núcleos interfásicos foram pontuados usando critérios convencionais de pontuação (Munné et al., 1998b). As combinações das sondas foram avaliadas qualitativamente com respeito à discreção e brilho do sinal, e os dados quantitativos foram usados para estimar a eficiência de cada sonda independentemente e a especificidade de cada ensaio. Como é exigido no Reino Unido, foi obtida uma licença da Human Fertilisation and Embryology Authority (HFEA) para realizar PGD para cada combinação diferente de sondas.

Estudos de Esperma FISH foram realizados em espermatozóides maduros decondensados com 10 mmol/l de ditiotreitol (DTT) utilizando as combinações de sondas e o método descrito abaixo.

Espiculação ovariana, cultura de embriões e biópsia

Estes são os descritos anteriormente (Scriven et al.., 2000). Resumidamente, a regulação para baixo da fase luteal com hormônio agonadotrofina liberadora de gonadotrofina intranasal (Suprefact; Hoechst) foi seguida pela estimulação ovariana com 225 i.u. diários de FSH recombinante (Gonal-F, Serono). A gonadotrofina coriônica humana (HCG; Profasi, Serono) foi administrada quando pelo menos três folículos tinham >18mm de diâmetro. A recuperação de oócitos foi realizada por punção guiada por ultra-som 36 h após a administração do HCG. Oócitos e embriões foram cultivados em meios sequenciais FIV (Science Scandinavia, Gothenberg, Suécia) sob óleo em 5% de CO2 no ar. Para a recolha de oócitos e fertilização nocturna foi utilizado o meio FIV. Normalmente os embriões fertilizados foram transferidos para microgotas G1.2 no dia 1, e microgotas G2.2 ao meio-dia no dia 2 para cultura nocturna. No dia 3 o procedimento de biópsia embrionária foi realizado após descompactação em meio de Biópsia de Embriões Escandinavos livre de Ca/Mg (Science Scandinavia) e solução de Tyrode acidificada para perfuração de zona. Os blastômeros foram avaliados quanto à presença de núcleos antes da biópsia, e um blastômero com núcleo distinto foi identificado para remoção de cada embrião. Os embriões foram então lavados e substituídos em microgotas G2.2 até a transferência do embrião no dia seguinte.

Espalhamento dos núcleos interfásicos dos blastômeros

Cada blastômero simples foi transferido para uma gota 1-2 μl de 0,2% Tween 20 em solução de HCl 0,01N em uma lâmina silanizada. O blastômero foi observado sob um estereomicroscópio durante o espalhamento para garantir a presença de um núcleo. As lâminas foram deixadas secar ao ar por ~20 min, lavadas em PBS por 5 min e desidratadas através de uma série de etanol.

FISH

Biopsied blastomeres foram hibridizados com sondas como a seguir: Casal A: indicador locus-specific (LSI) 21 (SpectrumOrange; Vysis, Inc., USA) e uma sonda biotinylated 14q subtelomere (não comercial); Casais B, C e D: QuintEssential 13 (digoxigenin-labelled, Appligene Oncor Lifescreen) e TelVysion 14q (SpectrumOrange; Vysis, Inc., EUA). O material alvo e a sonda foram co-denaturados a 75°C durante 5 min e depois hibridizados durante um mínimo de 14 h a 37°C. A lavagem com stringent para remover a sonda não ligada foi em 2× solução de citrato salino padrão (SSC) a 70-72°C durante 5 min. A sonda biotinylated probe was detected with fluorescein isothiocyanate (FITC)-Avidin (Vector Labs, Burlingame, CA); a sonda marcada com digoxigenina foi detectada com FITC-anti-digoxigenina (Boehringer Mannheim, UK). As preparações foram contra-manchadas com 4,6-diamino-2-fenil-indole (DAPI)/ Vectashield (Vector Labs) e visualizadas usando um microscópio de fluorescência Olympus, equipado com um conjunto de filtros Pinkel de 83 000. As imagens foram produzidas usando um software de imagem Quips (Vysis, UK).

Embriões não transferidos foram desagregados e espalhados no dia 4 ou 5 e os núcleos obtidos foram hibridizados com as mesmas misturas de sondas como acima.

Classificação dos resultados FISH

As taxas de erro FISH foram calculadas como descrito acima. Às células biopsiadas foi atribuído um estado ‘normal/balanceado’ se FISH indicou claramente dois sinais para cada cromossoma testado, como definido pelos critérios de pontuação publicados (Munné et al., 1998b). Aos embriões inteiros foi atribuído um estado ‘normal/balanceado’ se o FISH de seguimento mostrasse um padrão de sinal uniforme ‘normal/balanceado’ dentro das limitações do ensaio FISH (intervalo de confiança (IC) de 95% da especificidade com base no trabalho linfocitário). Por exemplo, se o ensaio FISH tivesse uma especificidade de 88%, um embrião de seguimento seria atribuído a um estado ‘normal/balanceado’ se até 3 dos 12 núcleos tivessem padrões de sinal desviantes, assumindo que nenhum mecanismo plausível para os padrões de sinal anormais (por exemplo, uma indicação clara de uma segunda linha celular) poderia ser invocado.

Células biopsiadas e embriões inteiros foram atribuídos um status ‘desequilibrado’ se os núcleos mostrassem um desvio claro e consistente do padrão de sinal ‘normal/balanceado’.

Células biopsiadas foram atribuídas um status ‘inconclusivo’ se o padrão de sinal não fosse um resultado normal claro, geralmente porque dois sinais estavam próximos um do outro, o que poderia ser pontuado como dois sinais, ou como um sinal ‘dividido’. Aos embriões inteiros foi atribuído um status ‘inconclusivo’ se a qualidade dos núcleos obtidos resultasse em hibridização pobre, o que significava que um diagnóstico conclusivo não era possível.

A todos os embriões foi atribuído um status ‘mosaico’ se houvesse evidência de duas linhas celulares, com base em núcleos ≥2 para cada linha celular.

A todos os embriões foram atribuídos um estado ‘caótico’ se houvesse uma proporção insuficiente (isto é, fora dos 95% CI, como acima) de núcleos com padrões de sinal uniformes para atribuir o embrião a uma das outras categorias.

Resultados

Caso A:

A parceira feminina de 39 anos tinha o cariótipo 45,XX,der(14;21)(q10;q10). Este casal tinha um filho fenotípico normal (cariótipo não conhecido) e uma gravidez anterior tinha sido encontrada com trissomia do cromossomo 21 de translocação (síndrome de Down). O trabalho de FISH para este casal mostrou que a eficiência da sonda LSI 21 e da sonda 14q foi de 97,4 e 90,7%, respectivamente. A especificidade do ensaio foi de 88,3%. Dois ciclos de PGD foram realizados.

No primeiro ciclo, 11 oócitos foram coletados, dos quais sete foram fertilizados normalmente, e cinco embriões foram biopsiados no terceiro dia. Destes, quatro deram um padrão de sinal normal/balanceado na célula biopsiada, e os três com a melhor morfologia no quarto dia foram transferidos. Não resultou nenhuma gravidez. O quinto embrião mostrou um padrão de sinal de +14, +21. Os embriões não transferidos e dois embriões anormalmente fertilizados foram espalhados no quarto dia. O FISH de acompanhamento confirmou o diagnóstico no embrião não transferido, normal/equilibrado, enquanto o quinto embrião mostrou um complemento caótico e triplóide. Os resultados estão detalhados na Tabela I.

No segundo ciclo, 15 oócitos foram coletados, 10 fertilizados normalmente e nove embriões foram biopsiados no terceiro dia. Destes, três apresentaram um padrão de sinal normal/equilibrado; todas as três foram transferidas, e resultou numa gravidez de um só botão. O casal optou pela amostragem das vilosidades coriónicas com 12 semanas de gestação e o feto demonstrou ter a forma equilibrada da translocação: 45,XX,der(14;21)(q10;q10). Uma menina fenotípica normal nasceu com 38 semanas de gestação. Dos embriões não transferidos, o diagnóstico de biópsia indicou um de +21, -21, +14 e -14, cada um, e dois inconclusivos. O acompanhamento FISH após a disseminação do embrião confirmou o diagnóstico de trissomia do cromossomo 21 e monossomia do cromossomo 21, mas os núcleos restantes dos embriões diagnosticados como aneuploide para o cromossomo 14 foram consistentes com um complemento cromossômico normal/balanceado. Além disso, um dos embriões com diagnóstico de biópsia inconclusiva também era consistente com normal/balanceado, enquanto o outro tinha degenerado e apenas um núcleo foi encontrado após a disseminação e nenhum diagnóstico foi obtido. Um embrião anormalmente fertilizado mostrou-se triplóide mosaico.

Por isso, para este casal, onde foi possível chegar a um diagnóstico e excluindo embriões anormalmente fertilizados, a percentagem global de embriões consistente com a segregação alternada (normal/equilibrada) foi de 77%, com 15% consistente com a segregação adjacente (trissomia de translocação ou monossomia). Dois dos embriões normais/balanceados foram diagnosticados como desequilibrados na biópsia, provavelmente como resultado de erro na técnica de FISH. Estes resultados estão detalhados na Tabela I.

Caso B

A parceira de 34 anos de idade tinha o cariótipo 45,XX,der(13;14)(q10;q10) e apresentava história de quatro abortos, dois dos quais cariotípicos e trissomia 14. O FISH work-up mostrou que a eficiência da sonda QuintEssential 13 e da sonda TelVysion 14q foi de 97,2 e 91,0%, respectivamente. A especificidade do ensaio foi de 88,5%. Um ciclo de PGD foi realizado.

Ten oócitos foram coletados, dos quais oito foram fertilizados normalmente usando FIV. Oito embriões foram biopsiados no terceiro dia, dos quais cinco apresentaram um padrão de sinal normal/balanceado (Tabela I). Três destes foram transferidos, resultando numa gravidez tripla e no subsequente nascimento de dois rapazes e uma rapariga, todos fenotípicamente normais e portadores da translocação. Dos embriões restantes, dois foram diagnosticados na biópsia como +13 e um como +14. A trissomia do cromossomo 14 e um dos diagnósticos da trissomia do cromossomo 13 foram confirmados no seguimento; o terceiro embrião anormal foi encontrado com um complemento cromossômico caótico. Dois embriões anormalmente fertilizados também foram disseminados; um era um mosaico triplóide e o outro era haplóide.

Dos embriões, 63% eram, portanto, consistentes com segregação alternada e 25% eram consistentes com segregação adjacente. Estes resultados estão detalhados na Tabela I.

Caso C

A parceira feminina de 37 anos tinha um cariótipo de 45,XX,der(13;14)(q10;q10). Nenhuma gravidez tinha sido alcançada após quatro anos sem contracepção. Dois ciclos de PGD foram realizados.

No primeiro ciclo, seis oócitos foram coletados, dos quais dois foram fertilizados com FIV. Um embrião foi adequado para biópsia e foi diagnosticado como normal/equilibrado e transferido. Não resultou nenhuma gravidez. Um embrião anormalmente fertilizado foi espalhado e encontrado haplóide.

No segundo ciclo, cinco oócitos foram coletados dos quais dois foram adequados para injeção usando ICSI. Ambos resultaram em embriões adequados para biópsia, foram diagnosticados como normais/balanceados e transferidos. Não resultou em gravidez (ver Tabela I).

Caso D

O parceiro masculino de 35 anos (parceiro feminino tinha 34 anos) tinha o cariótipo 45,XY,der(13;14)(q10;q10) e apresentava oligozoospermia (0,2-2×106/ml). O casal ainda não havia conseguido uma gravidez. O espermatozóide FISH indicou que 14% dos gametas eram aneuploides, tanto para o cromossomo 13 quanto para o cromossomo 14. Dois ciclos de PGD foram realizados.

No primeiro ciclo, cinco oócitos foram coletados e quatro foram fertilizados normalmente após ICSI. Quatro embriões foram biopsiados no terceiro dia; três deles foram diagnosticados como normais/balanceados e dois foram transferidos, mas não resultou em gravidez. O terceiro embrião normal/balanceado foi espalhado e considerado normal/balanceado no seguimento. O quarto embrião foi inconclusivo na biópsia e foi encontrado com monossomia 14 no seguimento.

No segundo ciclo, cinco oócitos foram coletados e todos fertilizados normalmente após ICSI. Cinco embriões foram biopsiados no terceiro dia, dos quais três foram diagnosticados como normais/balanceados e transferidos no quinto dia. Dos dois embriões não transferidos, um foi diagnosticado como +13 e um como -14. No entanto, em ambos os casos, o acompanhamento foi inconclusivo. Dos embriões, 67% foram portanto consistentes com um complemento normal/balanceado para os cromossomos de translocação. O resultado foi uma gravidez de uma só tonelada e o casal recusou o diagnóstico pré-natal. Um exame detalhado da anomalia fetal na 20ª semana de gestação mostrou anomalias fetais significativas, incluindo a agenesia do corpo caloso, um defeito do tubo neural e um defeito cardíaco do septo ventral. O cariótipo fetal foi encontrado na trissomia do cromossomo 18 primária após amniocentese. Esta anormalidade provavelmente não estava relacionada à translocação, mas um efeito intercromossômico não pode ser descartado (Blanco et al., 2000).

Caso E:

O parceiro masculino de 41 anos (parceiro feminino tinha 37 anos) (cariótipo 45,XY,der(13;14)(q10;q10)) tinha uma contagem de espermatozóides dentro da faixa de normalidade. A translocação tinha sido um achado incidental e a fertilidade do casal não estava estabelecida. Estudos de espermatozóides mostraram que 1,5% dos espermatozóides eram disomia 13 ou 14; o DGP não foi recomendado porque o casal tem uma alta chance de conseguir uma gravidez viável, cromossomicamente normal sem DGP.

Estes resultados estão resumidos nas Tabelas I e II. A Figura 1 mostra duas biópsias de embriões diferentes e resultados de acompanhamento.

Discussão

Dos embriões normalmente fertilizados aqui descritos, 20% foram o resultado de segregação anormal da translocação. Isto é consideravelmente maior do que os riscos teóricos no diagnóstico pré-natal, provavelmente porque in vivo a maioria dos embriões anormais falharia em estabelecer uma gravidez. O rastreio dos embriões com um produto desequilibrado do Robertsonian antes da transferência aumentaria as probabilidades de uma gravidez bem sucedida. Uma vez que as taxas de gravidez em curso após o DGP são da mesma ordem que as que se seguem à FIV/ICSI realizada para infertilidade, o DGP pode ser visto como um adjunto útil para a concepção assistida para casais com translocações Robertsonian que também têm problemas de fertilidade. Isto é independentemente da natureza do Robertsonian ou dos riscos reprodutivos empíricos associados a ele.

No entanto, o aconselhamento é necessário para casais com fertilidade comprovada. Um histórico de perda de gravidez recorrente pode não estar associado à translocação, particularmente no caso de 13;14 translocações de Robertsonian; esta ligação só pode ser estabelecida através da cariotipagem dos produtos da concepção, como no caso B acima, onde dois em cada quatro abortos foram mostrados como trissomia 14. Se o DGP for solicitado para casais onde não foi estabelecida uma ligação, deve ser considerado se é apropriado submeter uma mulher fértil a procedimentos de FIV quando o papel da translocação não é conhecido. A possibilidade de outros fatores contribuintes, como a síndrome antifosfolipídica, deve ser investigada minuciosamente e o casal deve ser aconselhado em conformidade.

Os riscos reprodutivos empíricos para os portadores masculinos de 13;14 Os portadores de translocação Robertsonian são baixos. O FISH de esperma usando sondas para os cromossomos de translocação pode ser usado para estabelecer o nível de aneuploidia, e no caso de uma contagem normal de espermatozóides e baixos níveis de aneuploidia, o PGD pode não ser indicado, como no caso E. Para alguns homens que apresentam oligozoospermia e uma translocação Robertsonian, como no Caso D, ICSI pode ser necessário para superar a infertilidade, caso em que o PGD seria um adjunto útil, como discutido acima.

Altos níveis de mosaicismo e caos em embriões de portadores de translocação Robertsonian têm sido relatados (Conn et al, 1998, 1999). Esses autores encontraram apenas 13% dos embriões testados eram normais ou equilibrados para os cromossomos de translocação. Nos ciclos aqui relatados, excluindo os embriões anormalmente fertilizados, 70% dos embriões estavam normais ou balanceados para os cromossomos de translocação. Apenas dois embriões (6%) eram caóticos, e o verdadeiro mosaicismo só foi observado nos embriões anormalmente fertilizados (Tabela I). Alguns embriões tinham células tetraplóides, indicando falha de cariocinese e/ou citocinese na célula amostrada e considerada como uma observação normal. Estes embriões não foram, portanto, classificados como mosaico. Nossos achados diferem do número publicado de 51% de embriões classificados como mosaico ou caótico; estes altos níveis podem ser um reflexo das condições de cultura embrionária (Scriven et al., 2000). Concluímos que as translocações de Robertsonian não predispõem a divisão celular anormal em embriões em fase de clivagem, embora continue sendo possível que alguns casais possam produzir uma proporção elevada de embriões cromossomicamente anormais (Munné et al., 1996; Delhanty et al, 1997), possivelmente devido a defeitos nos mecanismos de controle do ciclo celular não associados a nenhum rearranjo cromossômico.

Em conclusão, este trabalho não suporta a alegação de que as translocações de Robertsonian predispõem a embriões com divisões anormais da clivagem. O PGD pode, portanto, ser considerado, e demonstrou ser uma estratégia eficaz para portadores desses rearranjos cromossômicos. A falta de um resultado bem sucedido para um dos casais descritos é provavelmente devido a problemas de fertilidade superiores, não relacionados com a translocação. Temos esperança que uma gravidez bem sucedida possa ser estabelecida para este casal num ciclo futuro. Em qualquer caso de subfertilidade, o DGP pode ser visto como uma tela valiosa para o desequilíbrio, mesmo quando o risco de anomalias cromossômicas viáveis é baixo. O aconselhamento de casais portadores destas translocações deve ter em conta a história obstétrica anterior do casal e de outros portadores na família, em conjunto com os valores de risco estabelecidos de aborto e anomalias cromossómicas ao nascimento; o DGP pode nem sempre ser indicado.

Os autores desejam agradecer a contribuição dos outros membros do Centro de Guy e St Thomas para o PGD.

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