hi
cât de diferite sunt EGFP și GFP una de alta?
și anticorpul GFP recunoaște și EGFP? dacă amândouă au nevoie de anticorpi diferiți îmi puteți spune numele lor
mersi
cât de diferite sunt EGFP și GFP una de alta?
și anticorpul GFP recunoaște și EGFP? dacă ambele au nevoie de anticorpi diferiți îmi puteți spune numele lor
mersi
EgFP (Enhanced GFP) și GFP diferă pentru câțiva aminoacizi care fac ca EGFP să aibă o fluorescență mai puternică decât GFP. Un anticorp anti-GFP poate recunoaște și EGFP. Eu folosesc un anti-GFP de la Abcam pentru a recunoaște EGFP.
EGFP este un mutant al GFP. Are o fluorescență crescută, iar vârful de excitație majoritar al proteinei a fost deplasat la 490 nm, cu vârful de emisie păstrat la 509 nm (EGFP).
U ar trebui să fie capabil să detecteze EGFP cu anticorpul anti-GFP.
Se crede, de asemenea, că EGFP este puțin mai puțin toxică pentru celulele care o exprimă. Toți anticorpii GFP cu care am lucrat identifică EGFP la fel de bine ca și GFP nativ. Cel de la clontech este grozav!
Este posibil să se schimbe EGFP în RFP sau YFP prin simplă mutageneză?
polyclonal anti-GFP de la Cell signaling funcționează bine, nu există nicio diferență pentru GFP original, EGFP sau mGFP;
CFP și YFP sunt mutații ale GFP, cred că clonarea cu vectorii corespunzători pare să fie mai simplă decât mutarea GFP; RFP? – nu am auzit niciodată de el, DSred (Clontech) funcționează bine
Aș prefera să lucrez cu vectorii respectivi de protide fluorescente decât să îi mutăm. Este mult mai ușor. În loc de YFP, aș lucra cu venus ( o versiune modificată a YFP), iar pentru RFP, aș lucra cu DsRed2 sau mCherry sau mStrawberry (laboratorul lui Tsien) – în funcție de experimente.
dsRed și celelalte proteine fluorescente roșii sunt destul de distincte de GFP-uri, astfel încât anticorpii împotriva GFP nu vor funcționa cu ele. Variantele CFP, YFP și eGFP sunt toate mici modificări față de GFP și vor fi detectate de anticorpii GFP.
Am auzit că acestea sunt diferite din cauza unei mutații punctiforme. De la fenilalanină la leucină dacă îmi amintesc bine.