ABSTRACT

Analiza expresiei genice este un instrument de cercetare comun pentru a studia rețelele care controlează expresia genelor, rolul genelor cu funcție necunoscută și răspunsurile organismelor induse de mediu. Majoritatea instrumentelor analitice utilizate pentru a analiza expresia genelor se bazează pe sinteza și cuantificarea exactă a ADNc pentru a obține rezultate reproductibile și cuantificabile. Până în prezent, majoritatea kiturilor comerciale de izolare și purificare a ADNc vizează molecule bicatenare, care nu reprezintă cu exactitate abundența transcriptelor. În prezentul raport, oferim o metodă simplă și rapidă de purificare a ADNc monocatenar, care prezintă o puritate și un randament ridicat. Această metodă se bazează pe tratarea cu RNază H și RNază A după sinteza ADNc, urmată de separarea în coloane rotative de silice și precipitarea în etanol. În plus, metoda noastră evită utilizarea de DNază I pentru a elimina ADN genomic din preparatele de ARN, ceea ce îmbunătățește randamentul ADNc. Ca raport de caz, metoda noastră s-a dovedit a fi utilă în purificarea ADNc monocatenar de la ciuperca patogenă Sporothrix schenckii.

.