hi
hvor forskellige er EGFP og GFP fra hinanden?
og genkender GFP-antistof også EGFP? hvis de begge kræver forskellige antistoffer kan du fortælle mig deres navne
tak

EGFP (Enhanced GFP) og GFP adskiller sig for nogle få aminosyrer, der gør EGFP fluorescerer stærkere end GFP. Et anti-GFP-antistof kan også genkende EGFP. Jeg bruger et anti-GFP fra Abcam til at genkende EGFP.

EGFP er en mutant af GFP. Den har øget fluorescens, og proteinets største excitationstop er blevet forskudt til 490 nm, mens emissionstoppen holdes ved 509 nm (EGFP).
U burde kunne detektere EGFP med anti-GFP-antistof.

EGFP menes også at være lidt mindre giftig for de celler, der udtrykker den. Alle GFP-antistoffer, jeg har arbejdet med, identificerer EGFP lige så godt som native GFP. Den fra clontech er fantastisk!

Er det muligt at ændre EGFP i til RFP eller YFP ved simpel mutagenese?

polyklonal anti-GFP fra Cell signaling virker godt, ingen forskel for original GFP, EGFP eller mGFP;
CFP og YFP er mutationer af GFP, jeg synes kloning med de tilsvarende vektorer ser ud til at være mere simpelt end at mutere GFP; RFP? – aldrig hørt om det, DSred (Clontech) virker fint

Jeg ville foretrække at arbejde med de respektive fluorescerende protienvektorer frem for at mutere dem. Det er meget nemmere. I stedet for YFP ville jeg arbejde med venus ( en modificeret version af YFP) og for RFP ville jeg arbejde med DsRed2 eller mCherry eller mStrawberry (Tsien’s lab)- afhængig af eksperimenterne.

dsRed og de andre røde fluorescerende proteiner er helt forskellige fra GFP’erne, så antistoffer mod GFP vil ikke fungere med dem. CFP-, YFP- og eGFP-varianterne er alle små ændringer i forhold til GFP og vil blive detekteret af GFP-antistoffer.