ABSTRACT

Analyse af genekspression er et almindeligt forskningsværktøj til at studere netværk, der kontrollerer genekspression, den rolle, som gener med ukendt funktion spiller, og miljømæssigt inducerede reaktioner hos organismer. De fleste af de analytiske værktøjer, der anvendes til analyse af genekspression, er afhængige af nøjagtig cDNA-syntese og -kvantificering for at opnå reproducerbare og kvantificerbare resultater. Hidtil har de fleste kommercielle kits til isolering og oprensning af cDNA været rettet mod dobbeltstrengede molekyler, som ikke nøjagtigt repræsenterer mængden af transskriptioner. I den foreliggende rapport giver vi en enkel og hurtig metode til oprensning af enkeltstrenget cDNA med høj renhed og højt udbytte. Denne metode er baseret på behandling med RNase H og RNase A efter cDNA-syntese, efterfulgt af separation i silica-spin-kolonner og ethanoludfældning. Desuden undgår vores metode brugen af DNase I til at fjerne genomisk DNA fra RNA-præparater, hvilket forbedrer udbyttet af cDNA. Som en case report viste vores metode sig at være nyttig ved oprensning af enkeltstrenget cDNA fra den patogene svamp Sporothrix schenckii.