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Beschreibung

Das Poly DYKDDDDK (FLAG) Peptid lyophilisiertes Pulver wurde aus 23 Aminosäureresten mit einem Molekulargewicht von 2.864 Da synthetisiert. Das Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp-Motiv wird in dem Peptid dreimal wiederholt. Acht Aminosäuren am C-Terminus bilden die klassische FLAG-Sequenz (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).

Eigenschaften

Aussehen (Farbe)

Weiß

Aussehen (Form)

Pulver

Form

Lyophilisiertes Pulver

Reinheit durch HPLC-MS

95.33 % (die letzte Charge) Poly FLAG Peptid lyophilisiertes Pulver

Konzentration

(Empfohlene Arbeitskonzentration ist 200-400 μg/mL für die Elution von FLAG-Fusionsproteinen aus den Anti-DYKDDDDK (FLAG) Beads.

Versendet in

blauem Eis

Lagertemperatur

2-8°C

Anwendung

Zur Verwendung bei der kompetitiven Elution von DYKDDDDK (FLAG)-Fusionsproteinen aus dem ANTI-FLAGmonoklonalen Antikörper in Lösung oder gebunden an Agarose auf den Anti-DYKDDDDK (FLAG)-Beads.

Achtung

1. Lesen Sie das Benutzerhandbuch vor dem ersten Gebrauch sorgfältig durch;
2. Vermeiden Sie das Einfrieren, Trocknen und Hochgeschwindigkeitszentrifugieren während der Verwendung und Lagerung der Beads;
3. Dieses Produkt ist nur für den R&D-Gebrauch bestimmt, nicht für Arzneimittel, Haushalt oder andere Zwecke. Bitte konsultieren Sie das Sicherheitsdatenblatt für Informationen über Gefahren und sichere Handhabung.

Verfahren

Peptidelution von DYKDDDDK(FLAG)-Fusionsprotein aus Anti-DYKDDDDK(FLAG)-Kügelchen

1. Das Anti-Flag-Affinitätsgel gründlich im Fläschchen suspendieren, um eine gleichmäßige Suspension des Harzes zu erreichen. Übertragen Sie schnell 10μl der Gelsuspension (etwa 5μl des gepackten Gelvolumens) in ein neues Röhrchen.

2. Fügen Sie 0,6 mL TBS hinzu. Das Anti-Flag-Affinitätsgel durch Pipettieren gründlich suspendieren. Zentrifugieren Sie das Harz 30 Sekunden lang bei 5000 rpm und entfernen Sie den Überstand vorsichtig. Achten Sie darauf, den gesamten Waschpuffer zu entfernen, ohne das Harz zu verwerfen. Wiederholen Sie den Vorgang 3-4 Mal.

3. 500 μl der Zellperiplasmalextrakte zum gewaschenen Harz hinzufügen.

4. Die Proben 2 Stunden lang bei 4°C vorsichtig schütteln.
5. Zentrifugieren Sie das Harz für 30 Sekunden bei 5000 U/min. Den Überstand in ein frisches Röhrchen überführen.
6. Das Harz mit 0,5 ml TBS waschen, bis die OD280 des Überstands 0,05 beträgt.
7. Elution des DYKDDDDK (FLAG)-Fusionsproteins durch Konkurrenz mit Poly-DYKDDDDK (FLAG)-Peptid. Elution des gebundenen DYKDDDDK(FLAG)-Fusionsproteins durch kompetitive Elution mit fünf Ein-Säulen-Volumen-Aliquots einer Lösung, die 200-400 ug/mL Poly DYKDDDDK(FLAG)-Peptid in TBS enthält.
8. das Recycling der Anti-DYKDDDDK(FLAG)-Beads
Das Poly-DYKDDDDK(FLAG)-Peptid eluiert möglicherweise nicht das gesamte DYKDDDDK(FLAG)-Fusionsprotein, das an die Anti-DYKDDDDK(FLAG)-Beads gebunden ist. Es wird empfohlen, die Anti-DYKDDDDK(FLAG)-Beads sofort nach Gebrauch durch Waschen mit drei 5-mL-Aliquots von 0,1 M Glycin-HCl, pH 3,5, zu regenerieren. Das Gel sollte sofort in TBS re-equilibriert werden, bis der Ausfluss einen neutralen pH-Wert aufweist.
Hinweis: Die Anti-DYKDDDDK(FLAG)-Beads nicht länger als 20 Minuten in Glycin-HCl belassen.
9. Lagerung der Anti-DYKDDDDK(FLAG)-Beads
Dreimaliges Waschen der Anti-DYKDDDDK(FLAG)-Beads mit 5 mL 50 % Glycerin mit 10 mM Natriumphosphat, 150 mM Natriumchlorid, pH 7,4, mit 0.02% (w/v) Natriumazid. dann fügen Sie eine weitere 5 mL von 50% Glycerin mit 10 mM Natriumphosphat, 150 mM Natriumchlorid, pH 7,4, enthaltend 0,02% (w/v) Natriumazidund lagern bei -20°C ohne Abtropfen.

Lagerung & Stabilität

Das Produkt bei 2-8°C lagern.

Dateidownload

Poly FLAG Peptid lyophilisiertes Pulver