hi
miten EGFP ja GFP eroavat toisistaan?
ja tunnistaako GFP-vasta-aine myös EGFP:n? jos molemmat vaativat eri vasta-aineen voi kertoa niiden nimet
kiitos

G EGFP (Enhanced GFP) ja GFP eroavat toisistaan muutamien aminohappojen osalta, jotka saavat EGFP:n fluoresoimaan voimakkaammin kuin GFP. Anti-GFP-vasta-aine voi tunnistaa myös EGFP:n. Käytän Abcamin anti-GFP:tä, joka tunnistaa EGFP:n.

EGFP on GFP:n mutantti. Sen fluoresenssi on lisääntynyt ja proteiinin pääeksitaatiopiikki on siirtynyt 490 nm:iin ja emissiopiikki on pysynyt 509 nm:ssä (EGFP).
U:n pitäisi pystyä havaitsemaan EGFP anti-GFP-vasta-aineella.

EGFP:n uskotaan myös olevan hieman vähemmän myrkyllinen sitä ilmentäville soluille. Kaikki GFP-vasta-aineet, joiden kanssa olen työskennellyt, tunnistavat EGFP:n yhtä hyvin kuin natiivin GFP:n. Clontechin vasta-aine on loistava!

Onko EGFP mahdollista muuttaa RFP:ksi tai YFP:ksi yksinkertaisella mutageneesillä?

Cell signalingin polyklonaalinen anti-GFP toimii hyvin, ei eroa alkuperäiseen GFP:hen, EGFP:hen tai mGFP:hen;
CFP ja YFP ovat GFP:n mutaatioita, luulen, että kloonaus vastaavilla vektoreilla vaikuttaa yksinkertaisemmalta kuin GFP:n mutaatio; RFP? – en ole koskaan kuullutkaan, DSred (Clontech) toimii hyvin

Työskentelisin mieluummin vastaavien fluoresoivien protiineja sisältävien vektoreiden kanssa kuin mutaatioiden kanssa. Se on paljon helpompaa. YFP:n sijasta työskentelisin venuksella ( muunneltu versio YFP:stä) ja RFP:n osalta työskentelisin DsRed2:lla tai mCherryllä tai mStrawberryllä (Tsienin laboratorio)- kokeista riippuen.

dsRed ja muut punaiset fluoresoivat proteiinit eroavat melkoisesti GFP:stä, joten vasta-aineet GFP:tä vastaan eivät toimi niiden kanssa. CFP-, YFP- ja eGFP-muunnokset ovat kaikki pieniä muutoksia GFP:stä ja ne havaitaan GFP-vasta-aineilla.

Olen kuullut, että nämä eroavat toisistaan pistemutaation vuoksi. Fenyylialaniinista leusiiniksi jos muistan oikein.