Hiiren raskaus voidaan ajoittaa kahdella tavalla: 1) käyttämällä emättimen sytologiaa hiiren estroosikierron vaiheen ja sopivan pariutumisajankohdan määrittämiseksi ja/tai 2) tarkastamalla naaraiden emätintulpat sen määrittämiseksi, onko pariutuminen tapahtunut.
Emättimen sytologian arviointi
Saadaksesi emätinnäytteen estroosikierron vaiheen määrittämistä varten työnnä kostutettu pumpulipuikolla varustettu tikku manuaalisesti hillityn hiiren emättimen aukkoaukkoon. Useimmat kaupallisesti saatavilla olevat vanupuikot ovat liian suuria, jotta ne mahtuisivat helposti keskikokoisen hiiren emättimen aukkoon, mutta sopivan kokoinen vanupuikko voidaan valmistaa kietomalla pieni määrä steriiliä vanuvillaa hammastikun tylpän pään ympärille. Pyöritä tikkua varovasti mutta tiukasti hiiren emättimessä pitäen huolta siitä, että kosketus emättimen seinämään säilyy. Kun tikku on poistettu, pyyhi se puhtaaseen lasiseen mikroskooppilasiin emätinnäytteen siirtämiseksi objektilasille. Anna objektilasin kuivua ilmakuivaksi ja levitä sitten 0,1-prosenttista metyleenisinisen vesiliuosta emätinmateriaalin värjäämiseksi. Kun värjäys on kuivunut, tutki näyte mikroskoopilla. Estroosin vaihe voidaan määrittää läsnä olevien solujen tyypin ja suhteellisen määrän perusteella:
- Jos hiiri on diestruksessa, näytteessä näkyy enimmäkseen polymorfonukleaarisia leukosyyttejä (PMN) ja joitakin epiteelisoluja.
- Jos hiiri on proestruksessa, näet enimmäkseen ydintyneitä ja sarveistuneita epiteelisoluja. Näet joitakin PMN-soluja, jos hiiri on varhaisessa proestruksessa.
- Jos hiiri on estruksessa, näet enimmäkseen sarveistuneita epiteelisoluja. Saatat nähdä muutamia nukleoituneita soluja, jos hiiri on varhaisessa estruksessa.
- Jos hiiri on metestruksessa, näet enimmäkseen maisemoituneita epiteelisoluja ja PMN:iä sekä joitakin ydintyneitä epiteelisoluja.
Kumpikin pariutuminen ja ovulaatio tapahtuvat tyypillisesti (mutta eivät poikkeuksetta) estruksen aikana, joka alkaa yleensä noin kuusi tuntia pimeän jakson alkamisen jälkeen ja kestää 12-14 tuntia. Ajastettua lisääntymistä varten naaras sijoitetaan uroksen kanssa proestrusvaiheen aikana. Varmistaaksesi, että pariutuminen on tapahtunut, tarkista naaraan emätintulppa seuraavana aamuna (ks. jäljempänä).
Emättimen tulpan tarkistaminen
Vaikka emättimen sytologista arviointia käytetään yleisesti parhaan lisääntymisaikataulun määrittämiseen joillakin kotieläinlajeilla (kuten koirilla), se ei ole yhtä käytännöllistä hiirille, koska niillä on hyvin lyhyt estroosikierto (yhteensä 4-5 päivää). Käytännöllisempi lähestymistapa hiirille on yksinkertaisesti sijoittaa uros ja naaras yhteen ja tarkastaa naaras varhain seuraavana aamuna emätintulpan varalta. Tulppa koostuu uroksen hyytyneistä eritteistä, jotka ovat peräisin uroksen hyytymis- ja rakkularauhasista. Se täyttää yleensä naaraan emättimen ja säilyy 8-24 tuntia lisääntymisen jälkeen. Tulpan voi havaita nostamalla naarasta sen hännän tyvestä ja tutkimalla sen emättimen aukkoa valkean massan varalta. Sitä voi olla vaikea nähdä, varsinkin jos sinulla on vähemmän kokemusta tästä toimenpiteestä. Voit nähdä sen paremmin, jos levität vulvan huulia hieman pumpulipuikolla tai litteän hammastikun tylpällä kärjellä. Jos tulppaa ei ole, jätä naaras uroksen kanssa ja tarkista se joka aamu, kunnes näet tulpan.
Jos tarvitset suuren määrän ajoitettuja tiineitä naaraita, voit hyödyntää feromonien ja sosiaalisten tekijöiden vaikutusta estrouskiertoon. Pidä naaraat suurissa ryhmissä, joissa ei ole uroksia lähellä. Tällä tavoin diestrus pitkittyy ja estrus tukahdutetaan, ilmiö tunnetaan Whitten-ilmiönä. Koska uroshiirten feromonit voivat häiritä tätä vaikutusta, on estettävä uroshiirten hajustimulaatio ryhmään sijoitetuille naaraille. Kun naaraat sijoitetaan urosten kanssa (yleensä 1-3 naarasta urosta kohti), useimpien naaraiden estroosikierto käynnistyy uudelleen kolmen päivän kuluessa. Parittelevat naaraat voidaan tunnistaa tutkimalla ne päivittäin emätintulpan varalta.
Emättimen tulpan olemassaolo ei takaa tiineyttä: se osoittaa vain, että seksuaalista toimintaa on tapahtunut. Tiineyden todennäköisyys parittelun jälkeen vaihtelee hiirikannasta ja siitä, missä vaiheessa estroosikiertoa parittelu tapahtuu. Useimmissa kannoissa tiinehtymistodennäköisyys on korkein niillä estrus-keskeytyneillä naarailla, joilla emätintulppa on löydetty kolmantena päivänä sen jälkeen, kun ne on asetettu uroksen kanssa. Esimerkkinä mainittakoon, että kun C3H/HeJ- ja BALB/cJ-naaraiden, joiden tulpat löydettiin kolmantena päivänä, tiinehtymisaste on ~100 % ja 44 %, se on vain 62 % ja 31 % niiden naaraiden, joiden tulpat löydettiin viidentenä päivänä. Sitä vastoin C57BL/6J-naaraiden tiinehtymisprosentti on vain 39 prosenttia niiden naaraiden osalta, joiden tulpat on löydetty kolmantena päivänä, ja 69 prosenttia niiden naaraiden osalta, joiden tulpat on löydetty neljäntenä päivänä.
Jos tulpattu naaras on tiineenä, ensimmäisenä tiineyspäivänä pidetään tulpan löytymistä seuraavaa päivää.