Presented at: ASRM 2017 – San Antonio, Texas
Tavoite: Määrittää sellaisten käyttökelpoisten alkioiden esiintyminen ja ploidiatilanne, jotka on johdettu munasoluista, joissa ei näy kahta pronominitumaketta (0PN) hedelmöittymisen arvioinnin aikaan.
Design: Retrospektiivinen tutkimus yksityisessä koeputkihedelmöityslaboratoriossa.
Materiaalit ja menetelmät: Kaikkiaan 3370 blastokystaa tunnistettiin morfologisesti sopiviksi tuoreen alkion siirtoon, vitrifikaatioon tai trofektodermin biopsian ottamiseen ploidistatuksen geneettistä testausta varten ja sen jälkeen tapahtuvaan vitrifikaatioon (eli käyttökelpoiset blastokystat). Käyttökelpoiset blastokystat saatiin päivänä 5, 6 tai 7. Kypsät munasolut hedelmöitettiin ICSI:llä, ja pronukleaarinen arviointi suoritettiin ja kirjattiin ylös käännetyllä mikroskoopilla 16-18 tuntia inseminaation jälkeen. Alkiot, joilla oli 2 pronomerosyyttiä, erotettiin kaikista muista alkioista, jotka olivat peräisin 0PN-, 1PN-, 3PN- ja ≥4PN-zygooteista. Alkioita kasvatettiin ryhmäviljelyssä jatkuvassa yksittäisessä kasvatusmediassa (Irvine Scientific). Sopivien blastokystien kromosomien kopioluku arvioitiin Illumina MiSeq -alustalla. Normaaleiksi ilmoitetuilla alkioilla ei ollut havaittavaa kopioluvun poikkeavuutta kynnysarvon ollessa ≤30 %. Kromosomien 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, 17, 19 ja/tai 22 koko kromosomin lisäykselle tai vähennykselle määriteltiin ≥50 prosentin kynnysarvo. Kromosomeille 6, 7, 8, 9, 11, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 21, X, Y ja kaikille segmentaalisille duplikaatioille ja/tai deleetioille minkä tahansa kromosomin osalta asetettiin ≥30 prosentin kynnysarvo. Monimutkaisen poikkeavuuden tulokseksi määriteltiin kolmen tai useamman kopioluvun poikkeavuuden yhdistelmä, joka koostui trisomiasta ja/tai monosomiasta.
Tulokset: 18 kuukauden aikana 830 tuoreen munasolun talteenotosta saatiin 7 258 zygoottia, joilla oli kaksi haploidista pronominitumaketta (2PN). Nämä 2PN-zygootit kehittyivät 3 349 käyttökelpoiseksi blastokystaksi (46 %). 2,9 prosentissa munasolunpoistoista oli käyttökelpoisia blastokystia, jotka olivat peräisin munasoluista, joissa ei ollut pronomyyttejä (0PN) hedelmöittymisen arviointihetkellä. 24 käyttökelpoista blastokystaa (0PN-zygooteista) 24 eri potilaalta lasitettiin. Näistä blastokystista 14:ää (58 %) ei testattu kromosomien kopioluvun vahvistamiseksi. 10 0PN-zygoteista peräisin olevaa blastokystaa seulottiin PGS:llä. Neljä alkiota (44 %) todettiin normaaleiksi, kun taas kaksi alkiota todettiin epänormaaliksi XO-alkioksi ja kolme alkiota monimutkaiseksi epänormaaliksi XY-alkioksi. Yhtään käyttökelpoista 0PN:stä peräisin olevaa blasotokystaa ei ole vielä siirretty.
Taulukko 1: Käyttökelpoisten 0PN-blastokystien ploidiatilanne
| Embryo | Tropektodermi Diagnoosi |
| 1 | kompleksinen +5, +8, +16; XY |
| 2 | Epänormaali; XO |
| 3 | Kompleksi -2, -3, +6, -8, -12; XY |
| 4 | Kompleksi +3, -5, +19, -15, -16, -17, -18. -19, +20, +21; XO |
| 5 | Epänormaali; XO |
| 6 | Normaali XX |
| 7 | Normaali XO |
| 8 | Normaali XY |
| 9 | Normaali XY |
| 10-24 | Tuntematon |
Johtopäätös: Tuloksemme osoittavat, että käyttökelpoiset blastokystat, jotka on johdettu zygoteista, joissa on epänormaali pronominytimen (0PN) muodostuminen, voivat kehittyä kromosomaalisesti normaaliksi alkioksi. Näillä alkioilla voi kuitenkin olla myös suuri mahdollisuus moninkertaisiin kromosomimuutoksiin tai -menetyksiin. Nämä tulokset ovat samankaltaisia kuin aiemmat raportit kehityspotentiaalista, kromosomianalyyseistä ja meneillään olevista raskauksista, jotka on saatu zygooteista, joissa on epänormaaleja pronominitumia1-3. Potilaita on neuvottava kromosomipoikkeavuuksista, jotka liittyvät epätyypillisistä zygooteista peräisin oleviin käyttökelpoisiin, testaamattomiin blastokystiin. Epänormaaleista zygoottialkioista, joissa on yksi pronomucleus (1PN), kolme pronomucleusta (3PN) tai enemmän (≥4PN), peräisin olevien käyttökelpoisten blastokystien ploidiatilanteen lisätutkimus voi antaa lisätietoa epänormaalin pronomucleuksen omaavien zygoottien säilytysarvosta.