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Descrizione
Il Poli DYKDDDDK (FLAG) Peptide polvere liofilizzata è stato sintetizzato da 23 residui aminoacidici con peso molecolare 2,864 Da. Il motivo Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp è ripetuto tre volte nel peptide. Otto aminoacidi al C-terminale costituiscono la classica sequenza FLAG (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Lys).
Proprietà
Bianco
Polvere
Polvere liofilizzata
95.33 % (l’ultimo lotto) Poli FLAG Peptide polvere liofilizzata
(La concentrazione di lavoro raccomandata è 200-400 μg/mL per eluire le proteine di fusione FLAG dalle perle Anti-DYKDDDDK (FLAG).
ghiaccio blu
2-8°C
Applicazione
Per l’uso nell’eluizione competitiva delle proteine di fusione DYKDDDDK (FLAG) dall’anticorpo monoclonale ANTI-FLAG in soluzione o legate all’agarosio sulle perle Anti-DYKDDDDK (FLAG).
Attenzione
1. Leggere attentamente il manuale d’uso prima del primo utilizzo;
2. Evitare il congelamento, l’essiccazione e la centrifugazione ad alta velocità durante l’uso e la conservazione delle microsfere;
3. Questo prodotto è solo per uso R&D, non per uso farmaceutico, domestico o altro. Si prega di consultare la scheda di sicurezza del materiale per informazioni riguardanti i pericoli e le pratiche di manipolazione sicura.
Procedura
Eluizione peptidica della proteina di fusione DYKDDDDK(FLAG) da perline Anti-DYKDDDDK(FLAG)
1. Sospendere accuratamente il gel di affinità Anti-Flag nella fiala, per una sospensione uniforme della resina. Trasferire rapidamente 10μl della sospensione del gel (circa 5μl del volume del gel confezionato) in una provetta nuova.
2. Aggiungere 0,6 mL di TBS. Sospendere accuratamente l’Anti-Flag Affinity Gel pipettando. Centrifugare la resina a 5000 rpm per 30 secondi e rimuovere attentamente il surnatante. Assicurarsi di rimuovere tutto il tampone di lavaggio senza scartare la resina. Ripetere 3-4 volte.
3. Aggiungere 500 μL di estratti periplasmatici di cellule alla resina lavata.
4. Agitare delicatamente i campioni per 2 ore a 4°C.
5. Centrifugare la resina per 30 secondi a 5000 rpm. Trasferire il surnatante in una nuova provetta.
6. Lavare la resina con 0.5mL di TBS fino a quando la OD280 del surnatante legge＜0.05.
7. Eluizione della proteina di fusione DYKDDDDK (FLAG) per competizione con il peptide Poly DYKDDDDK (FLAG). Eluire la proteina di fusione DYKDDDDK (FLAG) legata mediante eluizione competitiva con cinque aliquote del volume di una colonna di una soluzione contenente 200-400 ug/mL di poli DYKDDDDK (FLAG) peptide in TBS.
8. Riciclare le microsfere Anti-DYKDDDDK(FLAG)
Poli DYKDDDDK(FLAG) Peptidemay non eluisce tutta la proteina di fusione DYKDDK(FLAG) legata alle microsfere Anti-DYKDDDDK(FLAG). Si raccomanda di rigenerare le microsfere Anti-DYKDDDDK(FLAG) immediatamente dopo l’uso mediante lavaggio con tre aliquote da 5 mL di glicina HCl 0,1 M, pH 3,5. Il gel deve essere immediatamente riequilibrato in TBS fino a quando l’effluente è a pH neutro.
Nota: Non lasciare le perle Anti-DYKDDDDK(FLAG) in glicina HCl per più di 20 minuti.
9. Conservare le perle Anti-DYKDDDDK(FLAG)
Lavare le perle Anti-DYKDDDDK(FLAG) tre volte con 5 mL di glicerolo al 50% con fosfato di sodio 10mM, cloruro di sodio 150 mM, pH 7.4, contenente 0.02% (w/v) sodio azide. poi aggiungere altri 5 mL di glicerolo al 50% con 10 mM di sodio fosfato, 150 mM di sodio cloruro, pH 7.4, contenente 0,02% (w/v) sodio azidee conservare a -20 ° C senza drenaggio.
Conservazione & stabilità
Conservare il prodotto a 2-8°C.
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Poli FLAG Peptide polvere liofilizzata