ABSTRACT

El análisis de la expresión génica es una herramienta de investigación común para estudiar las redes que controlan la expresión génica, el papel de los genes con función desconocida y las respuestas de los organismos inducidas por el medio ambiente. La mayoría de las herramientas analíticas utilizadas para analizar la expresión génica se basan en la síntesis y cuantificación precisa del ADNc para obtener resultados reproducibles y cuantificables. Hasta ahora, la mayoría de los kits comerciales para el aislamiento y la purificación de ADNc se dirigen a moléculas de doble cadena, que no representan con precisión la abundancia de los transcritos. En el presente informe, proporcionamos un método sencillo y rápido para purificar el ADNc monocatenario, mostrando una alta pureza y rendimiento. Este método se basa en el tratamiento con RNasa H y RNasa A tras la síntesis de ADNc, seguido de la separación en columnas de sílice y la precipitación con etanol. Además, nuestro método evita el uso de la DNasa I para eliminar el ADN genómico de las preparaciones de ARN, lo que mejora el rendimiento del ADNc. Como caso práctico, nuestro método demostró ser útil en la purificación de ADNc monocatenario del hongo patógeno Sporothrix schenckii.