Gravidele cronometrate la șoareci pot fi configurate în două moduri: 1) se utilizează citologia vaginală pentru a determina stadiul ciclului estral al unui șoarece și momentul potrivit pentru împerechere; și/sau 2) se verifică dacă femelele prezintă dopuri vaginale pentru a determina dacă a avut loc împerecherea.

Evaluarea citologiei vaginale

Pentru a obține o probă vaginală pentru determinarea stadiului ciclului estral, se introduce un tampon umezit cu vârf de bumbac în deschiderea vaginală a unui șoarece imobilizat manual. Cele mai multe tampoane disponibile în comerț sunt prea mari pentru a încăpea cu ușurință în orificiul vaginal al unui șoarece de mărime medie, dar se poate realiza un tampon de dimensiuni adecvate prin înfășurarea unei cantități mici de vată sterilă în jurul capătului bont al unei scobitori. Rotiți tamponul ușor, dar ferm, în vaginul șoricelului, având grijă să mențineți contactul cu peretele vaginal. După ce ați îndepărtat tamponul, ștergeți-l pe o lamă de microscop din sticlă curată pentru a transfera specimenul vaginal pe lamă. Se lasă lampa să se usuce la aer, apoi se aplică o soluție apoasă de albastru de metilen de 0,1% pentru a colora materialul vaginal. După ce colorantul se usucă, examinați specimenul la microscop. Stadiul de estru poate fi determinat după tipurile și numărul relativ de celule prezente:

• Dacă șoarecele este în diestru, veți vedea mai ales leucocite polimorfonucleare (PMN) și câteva celule epiteliale.
• Dacă șoarecele este în proestru, veți vedea în principal celule epiteliale nucleate și cornificate. Veți vedea unele PMN-uri dacă șoarecele este în proestru timpuriu.
• Dacă șoarecele este în estru, veți vedea mai ales celule epiteliale cornificate. Este posibil să vedeți câteva celule nucleate dacă șoarecele este în estru timpuriu.
• Dacă șoarecele este în metestru, veți vedea mai ales celule epiteliale cornificate și PMN și câteva celule epiteliale nucleate.

Atât împerecherea cât și ovulația au loc de obicei (dar nu invariabil) în timpul estrului, care apare în general la aproximativ șase ore după debutul perioadei de întuneric și durează 12-14 ore. Pentru o reproducere programată, plasați femela cu un mascul în timpul fazei de proestru. Pentru a verifica dacă a avut loc împerecherea, verificați dacă femela prezintă un dop vaginal în dimineața următoare (a se vedea mai jos).

Verificarea dopurilor vaginale

Deși evaluarea citologiei vaginale este utilizată în mod obișnuit pentru a determina cel mai bun moment pentru împerechere la unele specii domestice (cum ar fi câinii), nu este la fel de practică pentru șoareci, deoarece aceștia au un ciclu estral foarte scurt (4-5 zile în total). O abordare mai practică pentru șoareci este de a plasa pur și simplu masculul și femela împreună, apoi de a verifica femela la începutul dimineții următoare pentru a vedea dacă există un dop vaginal. Dopul este format din secreții coagulate de la glandele coagulante și veziculare ale masculului. În general, acesta umple vaginul femelei și persistă timp de 8-24 de ore după împerechere. Pentru a vedea plugul, ridicați femela de baza cozii și examinați-i orificiul vaginal pentru a găsi o masă albicioasă. Poate fi dificil de văzut, mai ales dacă sunteți mai puțin experimentat în această procedură. Îl puteți vedea mai bine dacă depărtați ușor buzele vulvei cu un tampon cu vârf de vată sau cu capătul bont al unei scobitori plate. Dacă nu există un dop, lăsați femela cu masculul și verificați-o în fiecare dimineață până când vedeți un dop.

Dacă aveți nevoie de un număr mare de femele gestante cronometrate, puteți profita de influența feromonilor și a factorilor sociali asupra ciclului estral. Adăpostiți femelele în grupuri mari, fără masculi în apropiere. Procedând astfel, diestrul este prelungit și estrul este suprimat, un fenomen cunoscut sub numele de efectul Whitten. Deoarece feromonii de la șoarecii masculi pot interfera cu acest efect, trebuie evitată stimularea olfactivă a femelelor adăpostite în grup de către șoarecii masculi. Atunci când femelele sunt plasate cu masculi (de obicei, 1-3 femele per mascul), ciclul estral al majorității femelelor va reîncepe în trei zile. Pentru a le identifica pe cele care s-au împerecheat, examinați-le zilnic pentru a vedea dacă au un dop vaginal.

Prezența unui dop vaginal nu garantează sarcina: indică doar faptul că a avut loc o activitate sexuală. Probabilitatea de sarcină după împerechere variază în funcție de tulpina de șoareci și de faza ciclului estral când are loc împerecherea. Pentru majoritatea tulpinilor, rata de sarcină este cea mai mare în rândul femelelor fără estru, cu dopuri vaginale găsite în a treia zi după ce au fost puse cu un mascul. De exemplu, în timp ce rata de sarcină este de ~100% și, respectiv, 44% pentru femelele C3H/HeJ și BALB/cJ cu dopuri vaginale găsite în a treia zi, aceasta este de numai 62% și, respectiv, 31% pentru cele cu dopuri vaginale găsite în a cincea zi. În schimb, în timp ce rata de sarcină pentru femelele C57BL/6J este de numai 39% pentru cele cu dopuri găsite în a treia zi, aceasta este de 69% pentru cele cu dopuri găsite în a patra zi.

Dacă femela cu plug este gestantă, prima zi de gestație este considerată a fi ziua următoare celei în care se găsește plugul.