hi
hur olika är EGFP och GFP från varandra?
och känner GFP-antikroppen igen EGFP också? Om båda kräver olika antikroppar kan ni berätta vad de heter
Tack

EGFP (Enhanced GFP) och GFP skiljer sig åt i fråga om några aminosyror som gör att EGFP fluorescerar starkare än GFP. En anti-GFP-antikropp kan känna igen även EGFP. Jag använder en anti-GFP från Abcam för att känna igen EGFP.

EGFP är en mutant av GFP. Den har ökad fluorescens och proteinets stora excitationstopp har förskjutits till 490 nm med toppemissionen bibehållen vid 509 nm (EGFP).
U borde kunna upptäcka EGFP med anti-GFP-antikropp.

EGFP tros också vara lite mindre giftigt för de celler som uttrycker det. Alla GFP-antikroppar som jag har arbetat med identifierar EGFP lika bra som native GFP. Den från clontech är bra!

Är det möjligt att ändra EGFP till RFP eller YFP genom enkel mutagenes?

polyklonalt anti-GFP från Cell signaling fungerar bra, ingen skillnad för ursprunglig GFP, EGFP eller mGFP;
CFP och YFP är mutationer av GFP, jag tror att kloning med motsvarande vektorer verkar vara enklare än att mutera GFP; RFP? – har jag aldrig hört talas om, DSred (Clontech) fungerar bra

Jag skulle föredra att arbeta med respektive fluorescerande proteinvektorer framför att mutera dem. Det är mycket enklare. Istället för YFP skulle jag arbeta med venus ( en modifierad version av YFP) och för RFP skulle jag arbeta med DsRed2 eller mCherry eller mStrawberry (Tsiens lab) – beroende på experimenten.

DsRed och de andra röda fluorescerande proteinerna skiljer sig ganska mycket från GFP:erna, så antikroppar mot GFP fungerar inte med dem. CFP-, YFP- och eGFP-varianterna är alla små förändringar från GFP och kommer att upptäckas av GFP-antikroppar.

Jag har hört att dessa är olika på grund av en punktmutation. Fenylalanin till leucin om jag minns rätt.