ABSTRACT

Analys av genuttryck är ett vanligt forskningsverktyg för att studera nätverk som kontrollerar genuttrycket, rollen för gener med okänd funktion och miljöinducerade reaktioner hos organismer. De flesta analysverktyg som används för att analysera genuttryck är beroende av noggrann cDNA-syntes och kvantifiering för att få reproducerbara och kvantifierbara resultat. Hittills har de flesta kommersiella kit för isolering och rening av cDNA inriktats på dubbelsträngade molekyler, som inte exakt representerar transkriptens mängd. I denna rapport tillhandahåller vi en enkel och snabb metod för att rena enkelsträngat cDNA med hög renhet och högt utbyte. Metoden bygger på behandling med RNas H och RNas A efter cDNA-syntesen, följt av separation i kiseldioxidspinnkolonner och etanolutfällning. Dessutom undviker vår metod användningen av DNas I för att eliminera genomiskt DNA från RNA-preparat, vilket förbättrar cDNA-utbytet. Som en fallrapport visade sig vår metod vara användbar vid rening av enkelsträngat cDNA från den patogena svampen Sporothrix schenckii.