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Descripción
El polvo liofilizado del péptido Poly DYKDDDDK (FLAG) fue sintetizado por 23 residuos de aminoácidos con el peso molecular 2,864 Da. El motivo Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp se repite tres veces en el péptido. Ocho aminoácidos en el extremo C constituyen la secuencia clásica de FLAG (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Lys).
Propiedades
Blanco
Polvo
Polvo liofilizado
95.33 % (el último lote) Polvo liofilizado de péptidos Poly FLAG
(La concentración de trabajo recomendada es de 200-400 μg/mL para eluir las proteínas de fusión FLAG de las perlas Anti-DYKDDDDK (FLAG).
hielo azul
2-8°C
Aplicación
Para su uso en la elución competitiva de proteínas de fusión DYKDDDDK (FLAG) del anticuerpo monoclonal ANTI-FLAG en solución o unido a agarosa en las perlas Anti-DYKDDK (FLAG).
Atención
1. Lea atentamente el Manual de Usuario antes del primer uso;
2. Evite la congelación, el secado y la centrifugación a alta velocidad durante el uso y el almacenamiento de las perlas;
3. Este producto es para uso exclusivo de R&D, no para usos farmacéuticos, domésticos o de otro tipo. Por favor, consulte la hoja de datos de seguridad del material para obtener información sobre los peligros y las prácticas de manipulación seguras.
Procedimiento
Elución peptídica de la proteína de fusión DYKDDDDK(FLAG) a partir de las perlas Anti-DYKDDK(FLAG)
1. Suspender completamente el gel de afinidad Anti-Flag en el vial, para conseguir una suspensión uniforme de la resina. 2. Transferir rápidamente 10μl de la suspensión de gel (unos 5μl de volumen de gel empaquetado) a un tubo nuevo.
2. Añadir 0,6 mL de TBS. Suspender completamente el gel de afinidad antiplaca mediante un pipeteo. Centrifugar la resina a 5000 rpm durante 30 segundos y eliminar cuidadosamente el sobrenadante. Asegúrese de eliminar todo el tampón de lavado sin desechar la resina. Repetir 3-4 veces.
3. Añadir 500 μL de extractos periplásmicos celulares a la resina lavada.
4. Agitar suavemente las muestras durante 2 horas a 4°C.
5. Centrifugar la resina durante 30 segundos a 5000 rpm. Transferir el sobrenadante a un tubo nuevo.
6. Lavar la resina con 0,5mL de TBS hasta que la DO280 del sobrenadante sea＜0,05.
7. Eluir la proteína de fusión DYKDDDDK (FLAG) por competencia con el péptido Poly DYKDDDDK (FLAG). Eluir la proteína de fusión DYKDDDDK(FLAG) unida mediante elución competitiva con cinco alícuotas de un volumen de columna de una solución que contenga 200-400 ug/mL de péptido Poly DYKDDDDK(FLAG) en TBS.
8. El reciclaje de las perlas Anti-DYKDDK(FLAG)
Polipéptido DYKDDK(FLAG) puede no eluir toda la proteína de fusión DYKDDK(FLAG) unida a las perlas Anti-DYKDDK(FLAG). Se recomienda regenerar las perlas Anti-DYKDDK(FLAG) inmediatamente después de su uso, lavando con tres alícuotas de 5 mL de HCl de glicina 0,1 M, pH 3,5. El gel debe reequilibrarse inmediatamente en TBS hasta que el efluente tenga un pH neutro.
Nota: No deje las perlas Anti-DYKDDK(FLAG) en HCl de glicina durante más de 20 minutos.
9. Lavar las perlas Anti-DYKDDK(FLAG) tres veces con 5 mL de glicerol al 50% con 10mM de fosfato de sodio, 150 mM de cloruro de sodio, pH 7,4, conteniendo 0,02% (p/v) de sodio.02% (p/v) de azida sódica. A continuación, añada otros 5 mL de glicerol al 50% con 10 mM de fosfato sódico, 150 mM de cloruro sódico, pH 7,4, que contenga 0,02% (p/v) de azida sódica, y consérvelos a -20°C sin escurrirlos.
Almacenamiento & estabilidad
Almacenar el producto a 2-8°C.
Descarga de archivos
Polipéptido FLAG en polvo liofilizado