hi
hoe verschillend zijn EGFP en GFP van elkaar?
en herkent het GFP-antilichaam EGFP ook? Als ze allebei verschillende antilichamen nodig hebben, kan u me dan hun namen vertellen
dank

De EGFP (Enhanced GFP) en GFP verschillen voor een paar aminozuren die EGFP sterker doen fluoresceren dan GFP. Een anti-GFP antilichaam kan ook EGFP herkennen. Ik gebruik een anti-GFP van Abcam om EGFP te herkennen.

EGFP is een mutant van GFP. Het heeft een verhoogde fluorescentie en de belangrijkste excitatiepiek van het eiwit is verschoven naar 490 nm, terwijl de emissiepiek op 509 nm is gehouden (EGFP).
U zou EGFP moeten kunnen detecteren met anti-GFP-antilichaam.

EGFP wordt ook verondersteld een beetje minder toxisch te zijn voor de cellen die het tot expressie brengen. Alle GFP-antilichamen waarmee ik heb gewerkt, identificeren EGFP net zo goed als inheemse GFP. Die van clontech is geweldig!

Is het mogelijk om EGFP te veranderen in RFP of YFP door eenvoudige mutagenese?

polyclonale anti-GFP van Cell signaling werkt goed, geen verschil voor origineel GFP, EGFP of mGFP;
CFP en YFP zijn mutaties van GFP, ik denk dat klonen met de corresponderende vectoren eenvoudiger lijkt te zijn dan muteren van GFP; RFP? – nooit van gehoord, DSred (Clontech) werkt prima

Ik werk liever met de betreffende fluorescerende protien vectoren dan ze te muteren. Het is veel gemakkelijker. In plaats van YFP zou ik werken met venus (een gemodificeerde versie van YFP) en voor RFP zou ik werken met DsRed2 of mCherry of mStrawberry (Tsien’s lab) – afhankelijk van de experimenten.

dsRed en de andere rode fluorescerende eiwitten zijn heel verschillend van de GFP’s, zodat antilichamen tegen GFP niet met hen zullen werken. De CFP-, YFP- en eGFP-varianten zijn allemaal kleine veranderingen ten opzichte van GFP en zullen door GFP-antilichamen worden gedetecteerd.

Ik heb gehoord dat deze verschillend zijn als gevolg van een puntmutatie. Fenylalanine naar Leucine als ik me goed herinner.