Gepresenteerd op: ASRM 2017 – San Antonio, Texas

Doelstelling: Het bepalen van het voorkomen en de ploïdiestatus van bruikbare embryo’s afkomstig van oöcyten die geen twee pronuclei (0PN) vertonen op het moment van de beoordeling van de bevruchting.

Ontwerp: Retrospectieve studie in een particulier in-vitrofertilisatielaboratorium.

Materialen en methoden: In totaal werden 3.370 blastocysten geïdentificeerd als zijnde morfologisch geschikt voor verse embryotransfer, vitrificatie of trophectoderm biopsie voor genetische testen van ploïdie status gevolgd door vitrificatie (d.w.z. bruikbare blastocysten). Bruikbare blastocysten werden verkregen op dag 5, 6 of 7. Rijpe oöcyten werden bevrucht met ICSI en de pronucleaire status werd 16-18 uur na de inseminatie bepaald en vastgelegd met een omgekeerde microscoop. Embryo’s met 2 pronuclei werden gescheiden van alle andere embryo’s die voortkwamen uit 0PN, 1PN, 3PN en ≥4PN zygotes. Embryo’s werden in groep gekweekt in een continu enkel kweekmedium (Irvine Scientific). Het chromosomale kopiegetal werd voor geschikte blastocysten beoordeeld met het Illumina MiSeq-platform. Embryo’s die als normaal werden gerapporteerd, hadden geen detecteerbare kopiegetalafwijking, bij een drempelwaarde van ≤30%. Een drempelwaarde van ≥50% werd gedefinieerd voor elke gehele chromosoom winst/verlies voor chromosomen 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, 17, 19, en/of 22. Een drempelwaarde van ≥30% werd vastgesteld voor de chromosomen 6, 7, 8, 9, 11, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 21, X, Y en eventuele segmentale verdubbelingen en/of deleties voor elk van de chromosomen. Een complexe afwijking werd gedefinieerd als een combinatie van drie of meer afwijkingen van het kopienummer bestaande uit trisomie en/of monosomie.

Resultaten: Over een periode van 18 maanden, 830 verse eicel retrievals resulteerde in 7,258 zygotes met twee haploïde pronuclei (2PN). Deze 2PN zygoten ontwikkelden zich tot 3.349 bruikbare blastocysten (46%). 2,9% van de teruggehaalde oöcyten had bruikbare blastocysten afkomstig van oöcyten die geen pronuclei vertoonden (0PN) op het moment van de bevruchtingsbeoordeling. 24 bruikbare blastocysten (van 0PN zygotes) van 24 verschillende patiënten werden verglaasd. 14 (58%) van deze blastocysten werden niet getest op bevestiging van het chromosomale kopiegetal. 10 blastocysten afkomstig van 0PN zygotes werden gescreend met PGS. Vier embryo’s (44%) werden als normaal gerapporteerd, terwijl twee embryo’s als abnormaal XO werden gerapporteerd en drie embryo’s als complex abnormaal XY. Er heeft nog geen overdracht plaatsgevonden van een bruikbare blasotocyst afkomstig van een 0PN.

Tabel 1: Ploïdiestatus van bruikbare 0PN-blastocysten

Embryo	Trophectoderm Diagnose
1	Complex +5, +8, +16; XY
2	Anormaal; XO
3	Complex -2, -3, +6, -8, -12; XY
4	Complex +3, -5, +19, -15, -16, -17, -18. -19, +20, +21; XO
5	Aandoenlijk; XO
6	Normaal XX
7	Normaal XX
8	Normaal XY
9	Normaal XY
10-24	Onbekend

Conclusie: Onze resultaten tonen aan dat bruikbare blastocysten afkomstig van zygotes met abnormale pronucleaire (0PN) vorming zich kunnen ontwikkelen tot een chromosomaal normaal embryo. Deze embryo’s kunnen echter ook een grote kans hebben op meervoudige chromosomale winsten of verliezen. Deze resultaten zijn vergelijkbaar met eerdere rapporten over ontwikkelingspotentieel, chromosomale analyse en doorgaande zwangerschappen van zygoten met abnormale pronuclei1-3. Patiënten moeten worden geadviseerd over de chromosoomafwijkingen die gepaard kunnen gaan met niet-geteste bruikbare blastocysten afkomstig van atypische zygoten. Nader onderzoek naar de ploïdiestatus van bruikbare blastocysten afkomstig van abnormale zygotische embryo’s met één pronucleus (1PN), drie pronuclei (3PN) of hoger (≥4PN) kan nadere informatie opleveren over de retentiewaarde van abnormale pronucleaire zygotes.