falemos um pouco sobre clonagem de DNA que é tudo sobre fazer cópias idênticas de um pedaço de DNA e geralmente é um pedaço de DNA que codifica para algo que nos interessa é um gene que se expressará como uma proteína que pensamos ser útil de alguma forma agora você também já deve ter ouvido o termo clonagem em termos de Clone Wars e Star Wars ou Dolly the sheep e essa é uma idéia relacionada se você está clonando um animal ou um organismo como um poço de ovelha, então você está criando um animal que tem o material genético exato como o animal original, mas quando falamos sobre clonagem e clonagem de DNA estamos falando de algo um pouco mais simples, todos aqueles que veremos é ainda bastante fascinante, são cópias idênticas de um pedaço de DNA, então como fazemos isso bem, digamos que este é um fio de DNA aqui e eu estou apenas desenhando-o como uma linha, mas este é um duplo…e eu vou apenas anotar isto é um fio duplo Não quero ter de me dar ao trabalho de continuar a desenhar os fios múltiplos, deixe-me apenas desenhar, deixe-me apenas tentar desenhar os dois fios só para nos lembrarmos que isto é o ADN do fio duplo e digamos que esta parte do ADN tem um gene que queremos clonar, queremos fazer cópias disto aqui, por isso gene para clonar gene para clonar bem, a primeira coisa que queremos fazer é queremos cortar este gene de alguma forma e a forma como o fazemos é usando enzimas de restrição e há um monte de diferentes enzimas de restrição e eu pessoalmente acho fascinante que nós, como civilização, tenhamos chegado ao ponto de encontrar e identificar essas enzimas e sabemos em que pontos do DNA elas podem cortar elas reconhecem seqüências específicas e então podemos descobrir bem que enzima de restrição devemos usar para cortar diferentes pedaços de DNA mas chegamos a esse ponto como uma civilização, então usamos enzimas de restrição, podemos usar uma enzima de restrição, deixe-me usar uma cor diferente aqui, que se encaixa bem aqui e identifica a seqüência genética aqui e corta bem no lugar certo, então pode ser uma enzima de restrição bem ali e então você pode usar outra enzima de restrição que se identifica com a seqüência do outro lado que queremos cortar, então deixe-me rotular estas essas coisas ali mesmo são enzimas de restrição enzimas de restrição e então agora você teria depois de aplicar as enzimas de restrição você terá apenas aquele gene que você pode ter um pouco sobrando em cada lado mas essencialmente você cortou o gene que você usou as enzimas de restrição para cortar seu gene e então o que você quer fazer é colá-lo no que chamaremos de plasmídeo e um plasmídeo é um é um pedaço de material genético que fica fora dos cromossomas mas que pode reproduzir-se por muito tempo ou que, acho que podemos dizer que se pode replicar juntamente com a maquinaria do ou da maquinaria genética do organismo ou até se pode expressar tal como os genes do organismo que estão nos cromossomas se expressam, então é aqui que cortamos, deixa-me escrever isto, cortamos o gene e depois queremos colá-lo e depois queremos colá-lo num plasmídeo e os plasmídeos tendem a ser ADN circular, por isso vamos colá-lo num plasmídeo e, para que eles se encaixem, há muitas vezes estas saliências aqui, para que você possa ter uma saliência ali, você pode ter uma saliência ali e para que o plasmídeo que estamos a colocar possa ter pares de bases complementares sobre as saliências, o que permitirá que seja mais fácil para eles reagirem uns com os outros se tiverem estas saliências, por isso deixe-me colá-lo no plasmídeo e isto é porque obviamente GNA isto não são coisas que podemos gostar que você sabe manipular com nossas mãos da maneira que nós copiaríamos e colaríamos as coisas com fita adesiva você está fazendo estas soluções e você está aplicando as enzimas de restrição as enzimas de restrição estão apenas no corte em massa estas coisas eles estão batendo na maneira certa para causar esta reação a acontecer então você está pegando aqueles G e então você está colocando eles com os plasmídeos que por acaso têm as seqüências certas nas suas extremidades para que coincidam e depois também se coloca um monte de DNA ligase ligase para ligar as espinhas dorsais aqui mesmo e também vimos um DNA ligase quando estudamos a replicação para que seja DNA ligase que se possa pensar que ajuda a fazer a colagem e por isso agora temos este plasmídeo e queremos inseri-lo num organismo que pode fazer as cópias para nós e um organismo que é tipicamente usado é ou um tipo de organismo é uma bactéria e e-coli em particular e por isso o que podíamos fazer era dizer que temos um monte de, digamos que você tem um frasco aqui, você tem um frasco e tem uma solução nele com um monte de e.coli um monte de e.coli e você realmente não seria capaz de vê-lo visualmente, mas há e coli naquela solução e então você colocaria seus plasmídeos, que você teria ainda mais dificuldade de ver naquela solução e de alguma forma queremos a e coli que queremos que a bactéria pegue o plasmídeo e a técnica que normalmente é feita é dar algum tipo de choque no sistema que faz as bactérias tomarem os plasmídeos e o choque típico é um choque de calor e isto não é totalmente entendido como o calor da folha como o choque de calor funciona, mas funciona e assim as pessoas têm usado isto por algum tempo, então se você tem uma bactéria você tem uma bactéria aqui tem o seu ADN, por isso este é o seu material genético existente ali mesmo e deixe-me rotular esta é a bactéria que você coloca na presença dos nossos plasmídeos, então você coloca-a na presença do nosso plasmídeo e você aplica o choque térmico e algumas dessas bactérias vão tomar o plasmídeo que é vai pegar o plasmídeo e assim mesmo vai pegar o plasmídeo e assim mesmo vai pegar o plasmídeo e assim o que você então faz é colocar a solução que tem suas bactérias algumas das quais terão pegado o plasmídeo e você o coloca e então você tenta cultivar as bactérias em um prato então deixe-me desenhar isso então deixe-me desenhar isso aqui nós temos um prato para cultivar as nossas bactérias e ele tem nutrientes aqui mesmo que as bactérias podem crescer nele tem nutrientes que tem nutrientes e então você poderia dizer ok vamos colocar isto aqui e então um monte de bactérias vai apenas crescer para que você veja coisas como esta que seriam muitas muitas muitas muitas células de bactérias haveria uma colónia de bactérias que você poderia simplesmente deixá-las crescer, mas há um problema aqui porque eu mencionei que algumas das bactérias vão pegar os plasmídeos e algumas não vão e por isso você não sabe hey você sabe quando esta bactéria quando ela continua a replicar-se pode formar uma destas pode formar uma destas colónias, então esta é uma colónia que você gosta, então esta é uma boa colónia colocar uma marca de verificação lá, mas talvez esta colónia é formada por uma bactéria inicial ou um conjunto de bactérias que não pegou o plasmídeo para não conter o verdadeiro gene em questão, então você não quer que essa, então como você seleciona para as bactérias que Na verdade, você pegou bem o plasmídeo o que você faz é além do gene que você se importa que você quer fazer cópias de você também colocar um gene de resistência a antibióticos em seu plasmídeo então agora você tem um gene de resistência a antibióticos aqui e por isso só as bactérias e eu acho que é incrível que nós, como humanidade, temos capaz de fazer este tipo de coisas mas agora só as bactérias que absorveram o plasmídeo terão essa resistência aos antibióticos e por isso o que você faz é mover nutrientes mais antibióticos mais um antibiótico e assim este sobreviverá porque tem essa resistência tem esse gene que permite que não seja susceptível ao Mattox, mas estes não vão sobreviver, nem sequer vão acontecer, nem sequer vão crescer porque há antibióticos misturados com esses nutrientes e por isso isto é uma coisa muito fixe, começaste com o gene que te interessava, cortaste-o e colaste-o no nosso plasmídeo deixe-me escrever os rótulos no nosso plasmídeo que também continha um gene que pode dar resistência antibiótica a qualquer bactéria que absorve o plasmídeo que você coloca estes plasmídeos na presença das bactérias ou você fornece algum tipo de choque, talvez um choque térmico para que algumas das bactérias o absorvam e depois a bactéria começa a reproduzir-se e como se reproduz também está a reproduzir os plasmídeos e porque tem esta resistência aos antibióticos vai crescer nesta mistura de nutrientes antibióticos e as outras bactérias que não absorveram os plasmídeos não vão crescer e por isso, tal como você pode tomar isto você pode pegar essa colônia aqui mesmo e colocá-la em outra solução ou continuar a cultivá-la e você terá múltiplas cópias desse gene que estão dentro dessa bactéria agora a próxima pergunta e eu estou simplificando as coisas de forma bastante dramática também como você agora tem um monte de bactérias que têm um monte de cópias desse gene como você faz bom uso dele as próprias bactérias vamos dizer que o gene é para algo que você quer fabricar digamos insulina para diabéticos bem você poderia realmente usar essa maquinaria de bactérias que usamos é a sua maquinaria reprodutiva para continuar replicando a informação genética, mas você também pode é a sua maquinaria produtiva, acho que se pode dizer que vai expressar a sua existência no DNA, mas também pode expressar os genes que estão no plasmídeo, na verdade é isso que lhe dá a sua tia, que é o que daria à bactéria a sua resistência aos antibióticos, mas porque se este gene fosse dito para a insulina bem, então o as bactérias vão produzir um monte de insulina um monte de moléculas de insulina que você pode ser capaz de usar de alguma forma e eu não vou entrar em todos os detalhes de como você vai tirar a insulina e como você poderia fazer uso dela, mas não é preciso dizer que é muito legal que nós poderíamos até chegar a este ponto