Formaldehid fixálószerek

Információk a 37%-os formaldehidről

Nincs meghatározott életkor, amely után a 37%-os formaldehid már nem használható törzsoldatként. A formaldehid kémiája mérsékelten összetett, de más mikroszkópistákkal, gyártókkal folytatott megbeszélések és a vonatkozó szövegek áttekintése után a következő megállapítások alkalmazhatóak.

• A formaldehidet szobahőmérsékleten kell tárolni (a hideg hőmérséklet elősegíti a trioximetilén képződését, ami fehér csapadékot eredményez)
• A formaldehidet szorosan lezárva kell tárolni, mivel a levegőnek való kitettség elősegíti a formaldehid hangyasavvá oxidálódását (a 37%-os formaldehidet általában 10-15%-os metanollal együtt szállítják, hogy gátolják ezt a változást).

A 37%-os törzsoldatokra vonatkozó ajánlásunk: Ha a 37%-os formaldehid oldat tiszta, színtelen és nem tartalmaz csapadékot, és szobahőmérsékleten, jól záródó, napfénynek nem kitett palackban tárolták, akkor jónak kell lennie, azonban továbbra sem javasoljuk az 1 évnél régebbi törzsoldatok használatát. A 37%-os formaldehidet tartalmazó, már felbontott palackokat hat hónapnál tovább nem szabad használni. Következésképpen azt javasoljuk, hogy a laboratóriumok gyakrabban és kisebb mennyiségben vásárolják meg a formaldehidet, mint ahogyan azt talán a múltban tették.

A 37%-os formaldehid használata nem ajánlott elektronmikroszkópiai fixálószerekhez. Vagy a magasabb minőségű, metanolmentes formaldehid, vagy a paraformaldehidből készült friss oldat sokkal jobb választás (lásd a további megjegyzéseket alább).

Információk a 10%-os formalinról

A 10%-os pufferelt formalin fixálót sok laboratóriumban gyakran használják a szövetek tartósítására a rutin szövettani vizsgálatokhoz. A formaldehidnek nagyobb esélye van az oxidációra ebben a koncentrációban a szövetfixálóban, és végül az oldat pH-ja a puffer ellenére csökkenni kezd. Javasoljuk, hogy a 10%-os pufferelt formalinoldatokat legfeljebb 3 hónappal a kezdeti keverésük után használják fel. Az oldatnak tiszta, színtelen, csapadékmentesnek kell lennie, és a pH nem lehet 6,5 alatt.

A másik probléma a 10%-os pufferelt formalin esetében a metanol (a formaldehid öregedésének nemkívánatos mellékterméke) lassan növekvő koncentrációja. A metanol elősegíti a fehérjék csomósodását, a fehérjék keresztkötése helyett, amit a formaldehid végez. A metanolmentes fixálószer biztosítja a legjobb konzerválást, különösen akkor, ha a szövetet később antitestfestéshez kívánja felhasználni.

A metanol elkerülésének leggyakoribb módja a formaldehidoldatban az, hogy az oldatot frissen készíti el kristályos paraformaldehidből. A paraformaldehid meglehetősen veszélyes lehet a kezelése, és gyakran nehéz rávenni, hogy oldatba menjen. Ha az Ön laboratóriuma nem rendszeres felhasználója a formaldehid-fixálószereknek, van néhány egyszerűbb lehetőség, amelyet ajánlunk.

Az egyik lehetőség a metanolmentes formaldehid (aq) beszerzése zárt ampullákban. Egyszerűen adjon hozzá PBS-t a megfelelő formaldehidkoncentráció eléréséhez, és azonnal használja fel. Tíz 10 ml-es ampulla 16%-os metanolmentes formaldehid kb. 27 $-ba kerül.

A másik lehetőség, hogy 10%-os semleges pufferelt formalin (4%-os formaldehid) vásárol egy tudományos áruházban, 3-6 hónapig használja, majd kidobja (mint veszélyes anyagot). Ebben az oldatban lesz némi metanol (jellemzően 1-2%), de ha a vásárlás után hamarosan használják, ez a legtöbb felhasználó számára nem lehet jelentős. A pufferoldat segít lassítani a savasodási folyamatot. Egy literes üveg körülbelül 20-25 dollárba kerül. A fixálószert szobahőmérsékleten tárolja. Az oldal helyi olvasói forduljanak a CMM Histológiai Szolgáltató Laboratóriumához (626-4415), ha nem találnak szállítót. (Kérjük, vegye figyelembe, hogy a különböző beszállítók különböző pufferoldatokat használnak. A következetes immunhisztokémia és/vagy immunfluoreszcencia érdekében a felhasználóknak egy szállítóhoz kell ragaszkodniuk).

Néhány laboratórium kérdezett a puffereletlen 10%-os formalin használatáról. Hacsak nincs különleges oka ennek a választásnak, nem javasoljuk, mivel ez a fixálószer gyorsan savasodik. A szövetek néhány órán túli tárolása ebben a fixálóban erősen visszatartandó.

Ajánlások a minták optimális fixálásához

A szövetmintákat az állatból való eltávolítás után a lehető leggyorsabban fixálóba kell helyezni, a fixálónak legalább a szövet térfogatának 20-szorosának kell lennie, és a fixálót a fixálás első órája után ki kell cserélni.

A szövetet úgy kell vágni, hogy a legvékonyabb dimenzió legfeljebb 4-5 mm vastag legyen (a formalin penetrációja lassú, kb. 0,5 mm/óra). Ez körülbelül két amerikai negyeddolláros vastagságának felel meg. Ha a szövet vagy szerv vastag kapszulával rendelkezik (pl. vese), a felhasználóknak tisztában kell lenniük azzal, hogy a fixálószer penetrációja nem lesz olyan gyors a kapszulán keresztül. A túl vastag minták kívülről túlságosan, belülről pedig rosszul fixálódhatnak, ami a festési artefaktumok miatt értelmezési problémákat okozhat.

A kezdeti fixálásnak szobahőmérsékleten kell történnie, mivel a formalin penetrációja az oldat hőmérsékletétől függ. A formalint használat előtt óvatosan fel kell rázni, hogy elkerüljük a koncentrációgradienst az üvegben.

A fixálás ideje némileg függ a szövet vastagságától.

• A tenyésztett sejtek monolayereit nem kell sokáig fixálni, általában 15-30 perc elegendő. A tenyésztett sejteket a fixálás után a felhasználó laboratóriumában használt immunhisztokémiai/immunfluoreszcencia protokollba kell helyezni.
• A szöveteket és szerveket (méretüktől függően) 2 órától maximum 24 óráig kell fixálni. Ezt követően a szövetek rövid ideig (lehetőleg 3 napnál nem hosszabb ideig) 70%-os etanolban (aq) tárolhatók. A hosszabb tárolás bármelyik oldatban túlságosan megkeményítheti a szöveteket, ami a paraffinblokkok metszésének nehézségéhez vezet.

A standardizált rögzítési protokoll pontos követése a legmegfelelőbb eredményekhez vezet.

Formalin vs. formaldehid

Egyszer találkoztunk a formaldehid és a formalin közötti különbséggel kapcsolatos zavarokkal. Ez érthető probléma, mivel a kifejezéseket néha felcserélve használják. Helytelen a két szót így használni. A kémiai fixálószer koncentrációja, amelyet a két elnevezés jelöl, meglehetősen eltérő.

A 10%-os pufferelt formalinként megjelölt fixálószer valójában csak 4%-os formaldehidoldat. Ez azért van így, mert a 10%-os pufferelt formalin a régi szövettani szakzsargon egyik példája, amely egy 37-40%-os formaldehidből (pontosabban: 3,7-4%-os formaldehidoldatból) készült 10%-os oldatot ír le.

Formaldehid biztonság

Az Egyesült Államok Munkahelyi Biztonsági és Egészségvédelmi Hivatala (OSHA) nagymértékben aggódik a formaldehid miatt. Ha nincs a laboratóriumában a formaldehidre vonatkozó aktuális anyagbiztonsági adatlap (MSDS), akkor a SIRI MSDS Archive-ban találhat egyet.

Kérem, legyen tisztában a formaldehiddel kapcsolatos veszélyekkel. A következő állítás a 10%-os pufferelt formalinra vonatkozó biztonsági adatlapból származik:

“VESZÉLY! LENYELÉS ESETÉN HALÁLOS LEHET. BELÉLEGEZVE VAGY BŐRÖN KERESZTÜL FELSZÍVÓDVA ÁRTALMAS. IRRITÁLJA A BŐRT, A SZEMET ÉS A LÉGUTAKAT. ERŐSEN ÉRZÉKENYÍTŐ HATÁSÚ. VAKSÁGOT OKOZHAT. GYÚLÉKONY FOLYADÉK ÉS GŐZ. RÁKVESZÉLY GYANÚJA. FORMALDEHIDET TARTALMAZ, AMELY RÁKOT OKOZHAT. A rák kockázata az expozíció időtartamától és szintjétől függ.”

(a helyi olvasók számára) Az Arizonai Egyetem Kockázatkezelési Tanszékének van egy önképző programja “Hazard Communication Training for Formaldehyde” címmel. Ez az útmutató megismerteti Önt az OSHA 1992-es formaldehid-szabványának minden lényeges aspektusával. A Kockázatkezelés szerint “a 0,1%-nál nagyobb mennyiségű formaldehidoldatot vagy 0,1 ppm-nél több formaldehidet kibocsátani képes anyagokat használó személyek számára éves képzés szükséges”. Ez a legtöbbünkre vonatkozik, akik formaldehidet használnak szövettani vagy elektronmikroszkópos fixálószerekhez.

A “Formaldehidre vonatkozó veszélyközlési képzés” című kézikönyv egy példányának megszerzéséhez kérjük, forduljon közvetlenül a Kockázatkezelési és Biztonsági Osztályhoz (621-1570, csak az Arizonai Egyetem oktatói, dolgozói és hallgatói számára).

▲ lap teteje