Timed zwangerschappen bij muizen kunnen op twee manieren worden opgezet: 1) gebruik vaginale cytologie om het stadium van de oestrische cyclus van een muis en het juiste tijdstip voor paring te bepalen; en/of 2) controleer vrouwtjes op vaginale plugs om te bepalen of paring heeft plaatsgevonden.

Evaluatie vaginale cytologie

Om een vaginaal monster te verkrijgen voor het bepalen van het stadium van de oestrische cyclus, brengt u een bevochtigd wattenstaafje in de vaginale opening van een met de hand vastgezette muis. De meeste in de handel verkrijgbare wattenstaafjes zijn te groot om gemakkelijk in de vaginale opening van een muis van gemiddelde grootte te passen, maar een wattenstaafje van de juiste grootte kan worden gemaakt door een kleine hoeveelheid steriele watten rond het stompe uiteinde van een tandenstoker te wikkelen. Draai het wattenstaafje voorzichtig maar stevig rond in de vagina van de muis en zorg ervoor dat het contact houdt met de vaginawand. Veeg het wattenstaafje na verwijdering over een schoon glazen objectglaasje om het vaginale monster op het glaasje over te brengen. Laat het glaasje aan de lucht drogen en breng dan een 0,1% waterige oplossing van methyleenblauw aan om het vaginale materiaal te kleuren. Na droging van de kleurstof wordt het monster onder de microscoop onderzocht. Het stadium van de oestre kan worden bepaald aan de hand van de soorten en relatieve aantallen aanwezige cellen:

• Als de muis in diestrus is, ziet u vooral polymorfonucleaire leukocyten (PMN’s) en wat epitheelcellen.
• Als de muis in proestrus is, ziet u vooral gekernde en verhoornde epitheelcellen. U ziet enkele PMN’s als de muis in vroege proestrus is.
• Als de muis in oestrus is, ziet u vooral verhoornde epitheelcellen. U kunt een paar gekernde cellen zien als de muis in vroege bronst is.
• Als de muis in metestrus is, ziet u vooral verhoornde epitheelcellen en PMN’s en enkele gekernde epitheelcellen.

Paren en ovulatie vinden meestal (maar niet altijd) plaats tijdens de oestrus, die meestal ongeveer zes uur na het begin van de donkere periode optreedt en 12-14 uur duurt. Voor een getimede voortplanting moet het wijfje tijdens de bronstfase bij een mannetje worden geplaatst. Om te controleren of de paring heeft plaatsgevonden, controleert u het wijfje de volgende ochtend op een vaginale plug (zie hieronder).

Controle op vaginale plugs

Hoewel de beoordeling van vaginale cytologie bij sommige huisdiersoorten (zoals honden) algemeen wordt gebruikt om het beste tijdstip voor de voortplanting te bepalen, is dit voor muizen niet zo praktisch, omdat zij een zeer korte oestruscyclus hebben (in totaal 4-5 dagen). Een praktischer aanpak voor muizen bestaat erin het mannetje en het wijfje gewoon samen te zetten en het wijfje de volgende ochtend vroeg te controleren op een vaginale prop. De prop bestaat uit gecoaguleerde afscheidingen van de stollings- en blaasjesklieren van het mannetje. De prop vult meestal de vagina van het vrouwtje en blijft 8-24 uur na het broeden aanwezig. Om de prop te zien, tilt u het vrouwtje op aan de basis van haar staart en onderzoekt u haar vaginale opening op een witachtige massa. Het kan moeilijk te zien zijn, vooral als u minder ervaren bent in deze procedure. U kunt het beter zien als u de lippen van de vulva lichtjes spreidt met een wattenstaafje of het stompe uiteinde van een platte tandenstoker. Als er geen stop is, laat u het wijfje bij het mannetje en controleert u haar elke morgen tot u een stop ziet.

Als u grote aantallen drachtige wijfjes nodig hebt, kunt u gebruik maken van de invloed van feromonen en sociale factoren op de oestrische cyclus. Huisvest de vrouwtjes in grote groepen zonder mannetjes in de buurt. Op die manier wordt de diestrus verlengd en de oestrus onderdrukt, een fenomeen dat bekend staat als het Whitten-effect. Omdat feromonen van mannetjesmuizen dit effect kunnen verstoren, moet olfactorische stimulatie van de in groep gehuisveste wijfjes door mannetjesmuizen worden voorkomen. Wanneer de wijfjes bij mannetjes worden geplaatst (meestal 1-3 wijfjes per mannetje), zal de oestrische cyclus van de meeste wijfjes binnen drie dagen opnieuw op gang komen. Om de gedekte dieren te identificeren, moeten zij dagelijks worden onderzocht op een vaginale stop.

De aanwezigheid van een vaginale stop is geen garantie voor zwangerschap: zij geeft alleen aan dat er seksuele activiteit heeft plaatsgevonden. De kans op zwangerschap na de paring varieert met de muizenstam en met de fase van de oestrische cyclus waarin de paring plaatsvindt. Voor de meeste stammen is de kans op zwangerschap het hoogst bij oestrus-onderdrukte wijfjes met vaginale pluggen die worden gevonden op de derde dag nadat zij met een mannetje zijn gepaard. Het zwangerschapspercentage is bijvoorbeeld ~100% en 44% voor respectievelijk C3H/HeJ en BALB/cJ wijfjes met plugs die op de derde dag worden gevonden, maar slechts 62% en 31% voor die met plugs die op de vijfde dag worden gevonden. Daarentegen is het zwangerschapspercentage voor C57BL/6J-teven met op de derde dag gevonden plugs slechts 39%, maar voor die met op de vierde dag gevonden plugs 69%.

Als het geplugde wijfje zwanger is, wordt de eerste dag van de dracht beschouwd als de dag nadat de plug is gevonden.