hi
jak bardzo różnią się od siebie EGFP i GFP?
i czy przeciwciało GFP rozpoznaje również EGFP? if they both require different antibody can tell me their names
thanks

EGFP (Enhanced GFP) i GFP różnią się kilkoma aminokwasami, które sprawiają, że EGFP fluoryzuje silniej niż GFP. Przeciwciało anty-GFP może rozpoznać również EGFP. Używam anty-GFP z Abcam do rozpoznania EGFP.

EGFP jest mutantem GFP. Ma zwiększoną fluorescencję, a główny pik wzbudzenia białka został przesunięty do 490 nm z pikiem emisji utrzymanym na 509 nm (EGFP).
U powinien być w stanie wykryć EGFP z przeciwciałem anty-GFP.

EGFP jest również uważany za nieco mniej toksyczny dla komórek wyrażających. Wszystkie przeciwciała GFP, z którymi pracowałem, identyfikują EGFP tak dobrze jak natywne GFP. To z clontech jest świetne!

Czy możliwa jest zmiana EGFP w RFP lub YFP przez prostą mutagenezę?

poliklonalne anty-GFP z Cell signaling działa dobrze, nie ma różnicy dla oryginalnego GFP, EGFP lub mGFP;
CFP i YFP są mutacjami GFP, myślę, że klonowanie z odpowiednimi wektorami wydaje się być prostsze niż mutowanie GFP; RFP? – nigdy o tym nie słyszałem, DSred (Clontech) działa dobrze

Wolałbym pracować z odpowiednimi wektorami fluorescencyjnymi niż je mutować. Jest to o wiele łatwiejsze. Zamiast YFP, pracowałbym z venusem (zmodyfikowana wersja YFP), a dla RFP, pracowałbym z DsRed2 lub mCherry lub mStrawberry (laboratorium Tsien’a)- w zależności od eksperymentów.

dsRed i inne czerwone białka fluorescencyjne różnią się od GFP, więc przeciwciała dla GFP nie będą z nimi działać. Warianty CFP, YFP i eGFP są niewielkimi zmianami w stosunku do GFP i będą wykrywane przez przeciwciała GFP.

Słyszałem, że są one różne z powodu mutacji punktowej. Fenyloalanina do Leucyny, jeśli dobrze pamiętam.