A lista de marcadores e localizações foi desenvolvida por um painel de estudiosos e historiadores do blues. A trilha foi implementada em etapas, à medida que os fundos foram sendo disponibilizados. O National Endowment for the Arts, National Endowment for the Humanities e o Departamento de Transportes do Mississippi forneceram subsídios para o financiamento de vários marcadores, que são co-patrocinados com fundos das comunidades locais. Os textos dos marcadores são pesquisados e escritos pelos antigos editores da revista Living Blues Jim O’Neal e Scott Barretta, em conjunto com uma equipe editorial e de design que incluiu Wanda Clark; Chrissy Wilson; Allan Hammons; e Sylvester Oliver.
Prior à fundação do Mississippi Blues Trail, dois marcadores preliminares foram colocados em Indianola, Mississippi, numa esquina onde B.B. King tocou quando jovem, e no Club Ebony.
Os três primeiros marcadores do Mississippi Blues Trail foram dedicados em 11 de dezembro de 2006. O primeiro, em Holly Ridge, é dedicado ao pioneiro do Delta Blues Charley Patton.
O segundo marcador está localizado em frente ao Restaurante Southern Whispers na Nelson Street, em Greenville. Nelson Street, a casa de muitas casas noturnas, cafés e sucursais ao longo dos anos, já foi o principal centro de negócios, entretenimento e vida social afro-americana no Delta. Por muitas décadas esta faixa histórica atraiu multidões para a florescente cena do clube para ouvir blues do Delta; big band; jump blues; rhythm & blues; e jazz.
A terceira cerimônia de marcação foi no local original da estação de rádio WGRM em Greenwood, onde B.B. King transmitiu pela primeira vez como cantor gospel.
Até o final de 2016, o Mississippi Blues Trail tinha colocado quase 200 marcadores, não apenas em homenagem a artistas individuais, clubes, gravadoras, estações de rádio e eventos históricos, mas também na celebração de plantações, ruas, cidades e condados que eram centros de atividade do blues. A Penitenciária Estadual do Mississippi em Parchman também foi comemorada, já que folcloristas como Alan Lomax gravaram blues por detentos (principalmente Bukka White) em várias ocasiões, datando da década de 1930.