Lista znaczników i lokalizacji została opracowana przez panel uczonych i historyków bluesa. Szlak był realizowany etapami w miarę dostępności funduszy. National Endowment for the Arts, National Endowment for the Humanities i Departament Transportu Mississippi zapewniły dotacje na finansowanie różnych znaczników, które są współfinansowane z funduszy lokalnych społeczności. Teksty znaczników są badane i pisane przez byłych redaktorów magazynu Living Blues, Jima O’Neala i Scotta Barrettę, we współpracy z zespołem redakcyjnym i projektowym, w skład którego wchodzą Wanda Clark; Chrissy Wilson; Allan Hammons; i Sylvester Oliver.
Przed założeniem Mississippi Blues Trail, dwa wstępne znaczniki zostały umieszczone w Indianola, Mississippi, na rogu, gdzie B.B. King grał jako młody człowiek, oraz w Club Ebony.
Pierwsze trzy znaczniki Mississippi Blues Trail zostały poświęcone 11 grudnia 2006 roku. Pierwszy z nich, w Holly Ridge, poświęcony jest pionierowi bluesa z Delty, Charleyowi Pattonowi.
Drugi znacznik znajduje się przed restauracją Southern Whispers na Nelson Street w Greenville. Nelson Street, dom wielu klubów nocnych, kawiarni i juke joints przez lata, był kiedyś głównym centrum afroamerykańskiego biznesu, rozrywki i życia społecznego w Delcie. Przez wiele dziesięcioleci ten historyczny pas przyciągał tłumy do kwitnącej sceny klubowej, aby usłyszeć Delta blues; big band; jump blues; rhythm & blues; i jazz.
Trzecia ceremonia znakowania odbyła się w oryginalnej lokalizacji stacji radiowej WGRM w Greenwood, gdzie B.B. King po raz pierwszy nadawał jako śpiewak gospel.
Do końca 2016 roku Mississippi Blues Trail umieścił prawie 200 znaczników, nie tylko na cześć poszczególnych artystów, klubów, wytwórni płytowych, stacji radiowych i wydarzeń historycznych, ale także na cześć plantacji, ulic, miast i hrabstw, które były centrami bluesowej aktywności. Więzienie Stanowe Mississippi w Parchman również zostało upamiętnione, ponieważ folkloryści tacy jak Alan Lomax nagrali bluesa w wykonaniu więźniów (przede wszystkim Bukka White) przy kilku okazjach, sięgających lat 30-tych.