Fixatori cu formaldehidă

Informații despre formaldehida 37%

Nu există o vârstă definitivă după care formaldehida 37% nu mai este utilă ca soluție stoc. Chimia formaldehidei este moderat de complexă, dar în urma discuțiilor cu alți microscopiști, producători și a revizuirii textelor relevante, următoarele observații sunt aplicabile.

• Formaldehida trebuie depozitată la temperatura camerei (temperaturile scăzute favorizează formarea trioximetilenei cu precipitat alb rezultat)
• Formaldehida trebuie depozitată ermetic, deoarece expunerea la aer încurajează oxidarea formaldehidei în acid formic (formaldehida 37% este de obicei expediată cu 10-15% metanol pentru a inhiba această modificare).

Recomandarea noastră privind soluțiile stoc de 37%: Dacă o soluție de formaldehidă 37% este limpede, incoloră și nu are precipitat și a fost depozitată la temperatura camerei într-o sticlă bine închisă care nu a fost expusă la lumina soarelui, ar trebui să fie bună, totuși, tot nu recomandăm utilizarea unei sticle de rezervă mai veche de 1 an. Sticlele de formaldehidă 37% care sunt deja deschise nu ar trebui să fie folosite mai mult de șase luni. În consecință, recomandăm laboratoarelor să își achiziționeze formaldehida mai frecvent și în cantități mai mici decât poate au făcut-o în trecut.

Utilizarea formaldehidei 37% nu este recomandată pentru fixatorii de microscopie electronică. Fie o formaldehidă de calitate superioară, fără metanol, fie o soluție proaspătă obținută din paraformaldehidă este o alegere mult mai bună (a se vedea comentariile suplimentare de mai jos).

Informații despre formol 10%

Fixativul formalină tamponată 10% este utilizat în mod obișnuit pentru a conserva țesuturile pentru histologia de rutină în multe laboratoare. Formaldehida are o șansă mai mare de oxidare în această concentrație de fixator de țesuturi și, în cele din urmă, soluția va începe să scadă în pH, în ciuda tamponului. Recomandăm ca soluțiile de formalină tamponată 10% să nu fie utilizate mai mult de 3 luni după ce au fost amestecate inițial. Soluția trebuie să fie limpede, incoloră, fără precipitat, iar pH-ul nu trebuie să fie mai mic de 6,5.

O altă problemă cu formalina tamponată 10% este concentrația de metanol (un produs secundar nedorit al îmbătrânirii formaldehidei) care crește lent. Metanolul favorizează aglomerarea proteinelor, în loc de reticulația proteinelor pe care o realizează formaldehida. Un fixator fără metanol va oferi cea mai bună conservare, în special dacă intenționați să folosiți ulterior țesutul pentru colorarea cu anticorpi.

Cel mai comun mod de a evita metanolul într-o soluție de formaldehidă este de a prepara soluția proaspătă din paraformaldehidă cristalină. Paraformaldehida poate fi destul de periculoasă la manipulare și este adesea dificil să o faci să intre în soluție. Dacă laboratorul dvs. nu este un utilizator obișnuit de fixatori de formaldehidă, există câteva opțiuni mai ușoare pe care le recomandăm.

O primă opțiune este să cumpărați formaldehidă (aq) fără metanol în fiole sigilate. Pur și simplu adăugați PBS pentru a obține concentrația corectă de formaldehidă și utilizați imediat. Zece fiole de 10 ml de formaldehidă fără metanol de 16% costă aproximativ 27 de dolari.

Celealaltă opțiune este să cumpărați formalină tamponată neutră de 10% (formaldehidă de 4%) de la o casă de aprovizionare științifică, să o folosiți timp de 3-6 luni și apoi să o aruncați (ca material periculos). În această soluție va exista o anumită cantitate de metanol (de obicei 1-2%), dar dacă este utilizată la scurt timp după cumpărare, acest lucru nu ar trebui să fie semnificativ pentru majoritatea utilizatorilor. Soluția tamponată ajută la încetinirea procesului de acidificare. O sticlă de un litru costă aproximativ 20-25 de dolari. Păstrați fixatorul la temperatura camerei. Cititorii locali ai acestei pagini ar trebui să contacteze CMM Histology Service Lab (626-4415) în cazul în care întâmpinați dificultăți în localizarea unui furnizor. (Vă rugăm să rețineți că diferiți furnizori folosesc soluții tampon diferite. Pentru o imunohistochimie și/sau imunofluorescență consistentă, utilizatorii ar trebui să se limiteze la un singur furnizor).

Câteva laboratoare au întrebat despre utilizarea formalinei 10% netamponate. Cu excepția cazului în care există un motiv specific pentru această alegere, nu o recomandăm, deoarece acest fixator devine rapid acid. Ar trebui descurajată cu tărie depozitarea țesuturilor în acest fixator mai mult de câteva ore.

Recomandări pentru fixarea optimă a specimenelor

Specimenele de țesut ar trebui plasate în fixator cât mai repede posibil după ce au fost îndepărtate de la un animal, fixatorul ar trebui să fie de cel puțin 20 de ori mai mare decât volumul țesutului, iar fixatorul ar trebui schimbat după prima oră de fixare.

Tesutul trebuie tăiat astfel încât dimensiunea cea mai subțire să nu fie mai mare de 4-5 mm în grosime (penetrarea formolului este lentă, aproximativ 0,5 mm/oră). Aceasta este aproximativ grosimea a două sferturi de dolar american. În cazul în care țesutul sau organul are o capsulă groasă (de exemplu, rinichiul), utilizatorii trebuie să fie conștienți de faptul că penetrarea fixatorului nu va fi la fel de rapidă prin capsulă. Probele prea groase pot sfârși prin a fi prea bine fixate în exterior și prost fixate în interior, ceea ce cauzează probleme de interpretare din cauza artefactelor de colorare.

Fixarea inițială trebuie să se facă la temperatura camerei, deoarece penetrarea formalinei este legată de temperatura soluției. Formalinul ar trebui să fie ușor agitat înainte de utilizare pentru a evita un gradient de concentrație în flacon.

Timpurile de fixare depind oarecum de grosimea țesutului.

• Nu este nevoie ca monostraturile de celule cultivate să fie fixate mult timp, de obicei 15-30 min sunt adecvate. Celulele cultivate ar trebui să treacă de la fixare în orice protocol pe care laboratorul utilizatorului îl folosește pentru imunohistochimie/imunofluorescență.
• Tesuturile și organele ar trebui fixate (în funcție de mărimea lor) timp de 2 ore până la maximum 24 de ore. După aceea, țesuturile pot fi păstrate pentru perioade scurte de timp (de preferință nu mai mult de 3 zile) în etanol 70% (aq). O păstrare mai îndelungată în oricare dintre soluții poate face ca țesutul să devină prea tare și duce la dificultăți în secționarea blocurilor de parafină.

Să urmați cu meticulozitate un protocol de fixare standardizat va duce la cele mai consistente rezultate.

Formalină vs. formaldehidă

Ocazional am întâlnit unele confuzii cu privire la diferența dintre formaldehidă și formalină. Aceasta este o problemă de înțeles, deoarece termenii sunt uneori folosiți interschimbabil. Este incorect să folosim cele două cuvinte în acest fel. Concentrațiile de fixator chimic pe care le reprezintă cele două denumiri sunt destul de diferite.

Un fixator etichetat ca formalină tamponată 10% este de fapt doar o soluție de formaldehidă de 4%. Acest lucru se datorează faptului că 10% formalină tamponată este un exemplu de jargon de histolog din vechime care descrie o soluție de 10% făcută dintr-un flacon stoc de 37-40% formaldehidă (sau mai precis: o soluție de 3,7-4% de formaldehidă).

Siguranța formaldehidei

Administrația pentru Sănătate și Securitate în Muncă a Statelor Unite ale Americii (OSHA) este foarte preocupată de formaldehidă. Dacă nu aveți în laborator o fișă de date de securitate a materialelor (MSDS) actuală pentru formaldehidă, puteți găsi una în arhiva SIRI MSDS.

Vă rugăm să fiți conștienți de pericolele implicate de formaldehidă. Următoarea afirmație provine dintr-o fișă de date de securitate pentru formol tamponat 10%:

“PERICOL! POATE FI FATAL DACĂ ESTE ÎNGHIȚITĂ. DĂUNĂTOR DACĂ ESTE INHALAT SAU ABSORBIT PRIN PIELE. PROVOACĂ IRITAȚII ALE PIELII, OCHILOR ȘI TRACTULUI RESPIRATOR. PUTERNIC SENSIBILIZATOR. POATE PROVOCA ORBIRE. LICHID ȘI VAPORI COMBUSTIBILI. PERICOL SUSPECT DE CANCER. CONȚINE FORMALDEHIDĂ CARE POATE PROVOCA CANCER. Riscul de apariție a cancerului depinde de durata și nivelul de expunere.”

(pentru cititorii locali) Departamentul de Management al Riscurilor al Universității din Arizona are un program de autoinstruire numit “Hazard Communication Training for Formaldehyde”. Acest ghid vă va prezenta toate aspectele relevante ale standardului OSHA 1992 pentru formaldehidă. Potrivit Risk Management, “este necesară o instruire anuală pentru persoanele care utilizează soluții de formaldehidă mai mari de 0,1% sau materiale capabile să elibereze mai mult de 0,1 ppm de formaldehidă”. Acest lucru i-ar include pe cei mai mulți dintre noi care folosim formaldehidă pentru fixatori pentru histologie sau microscopie electronică.

Pentru a obține o copie a handout-ului “Hazard Communication Training for Formaldehyde”, vă rugăm să contactați direct Departamentul de Management al Riscurilor și Securitate (621-1570, numai pentru facultatea, personalul și studenții Universității din Arizona).

▲ începutul paginii

.