Fijadores de Formaldehído

Información sobre el Formaldehído al 37%

No hay una edad definitiva después de la cual el Formaldehído al 37% ya no es útil como solución madre. La química del formaldehído es moderadamente compleja, pero después de las discusiones con otros microscopistas, fabricantes y la revisión de los textos pertinentes, las siguientes observaciones son aplicables.

• El Formaldehído debe almacenarse a temperatura ambiente (las temperaturas frías favorecen la formación de trioximetileno con el consiguiente precipitado blanco)
• El Formaldehído debe almacenarse bien cerrado, ya que la exposición al aire favorece la oxidación del formaldehído a ácido fórmico (el formaldehído al 37% suele enviarse con un 10-15% de metanol para inhibir este cambio).

Nuestra recomendación respecto a las soluciones madre al 37%: Si una solución de formaldehído al 37% es clara, incolora y no tiene precipitados, y ha sido almacenada a temperatura ambiente en una botella bien cerrada que no ha sido expuesta a la luz solar, debería ser buena, sin embargo, todavía no recomendamos usar una botella de stock que tenga más de 1 año. Los frascos de formaldehído al 37% ya abiertos no deberían utilizarse más de seis meses. En consecuencia, recomendamos que los laboratorios compren su formaldehído con más frecuencia y en cantidades más pequeñas de lo que quizás hayan hecho en el pasado.

No se recomienda el uso de formaldehído al 37% para los fijadores de microscopía electrónica. Un formaldehído de mayor grado, sin metanol, o una solución fresca hecha de paraformaldehído es una opción mucho mejor (ver más comentarios a continuación).

Información sobre la formalina al 10%

El fijador formalina tamponada al 10% se utiliza comúnmente para preservar los tejidos para la histología de rutina en muchos laboratorios. El formaldehído tiene una mayor posibilidad de oxidación en esta concentración de fijador de tejidos y eventualmente la solución comenzará a bajar su pH, a pesar del tampón. Recomendamos que las soluciones de formalina tamponada al 10% no se utilicen más de 3 meses después de su mezcla inicial. La solución debe ser clara, incolora, sin precipitados y el pH no debe ser inferior a 6,5.

El otro problema de la formalina tamponada al 10% es la concentración lentamente creciente de metanol (un subproducto no deseado del envejecimiento del formaldehído). El metanol promueve la aglutinación de las proteínas, en lugar de la reticulación de las proteínas que realiza el formaldehído. Un fijador sin metanol proporcionará la mejor conservación, sobre todo si se planea utilizar el tejido para la tinción de anticuerpos en un momento posterior.

La forma más común de evitar el metanol en una solución de formaldehído es hacer la solución fresca de paraformaldehído cristalino. El paraformaldehído puede ser bastante peligroso de manejar y a menudo es difícil conseguir que entre en la solución. Si su laboratorio no es un usuario habitual de fijadores de formaldehído, hay un par de opciones más fáciles que recomendamos.

Una opción es comprar formaldehído (aq) sin metanol en ampollas selladas. Simplemente añada PBS para conseguir la concentración correcta de formaldehído y utilícela inmediatamente. Diez ampollas de 10 ml de formaldehído sin metanol al 16% cuestan aproximadamente 27 dólares.

La otra opción es comprar Formalina tamponada neutra al 10% (formaldehído al 4%) en una casa de suministros científicos, utilizarla durante 3-6 meses y luego desecharla (como material peligroso). Esta solución contendrá algo de metanol (normalmente un 1-2%), pero si se utiliza poco después de la compra, no debería ser significativo para la mayoría de los usuarios. La solución tamponada ayuda a ralentizar el proceso de acidificación. Una botella de un litro cuesta aproximadamente entre 20 y 25 dólares. Guarde el fijador a temperatura ambiente. Los lectores locales de esta página deben ponerse en contacto con el Laboratorio del Servicio de Histología del CMM (626-4415) si tienen problemas para localizar un proveedor. (Por favor, tenga en cuenta que diferentes proveedores utilizan diferentes soluciones tampón. Para una inmunohistoquímica y/o inmunofluorescencia consistente, los usuarios deberían quedarse con un solo proveedor).

Algunos laboratorios han preguntado sobre el uso de formalina al 10% sin amortiguar. A menos que haya una razón específica para esta elección, no la recomendamos ya que este fijador se vuelve rápidamente ácido. El almacenamiento de tejidos en este fijador más allá de varias horas debe ser fuertemente desaconsejado.

Recomendaciones para la fijación óptima de las muestras

Las muestras de tejido deben colocarse en el fijador tan rápidamente como sea razonable después de haber sido extraídas de un animal, el fijador debe ser al menos 20 veces el volumen del tejido y el fijador debe cambiarse después de la primera hora de fijación.

Los tejidos deben cortarse de forma que la dimensión más fina no supere los 4-5 mm de grosor (la penetración del formol es lenta, aproximadamente 0,5 mm/h). Esto es aproximadamente el grosor de dos cuartos de dólar. Si el tejido u órgano tiene una cápsula gruesa (por ejemplo, el riñón), los usuarios deben tener en cuenta que la penetración del fijador no será tan rápida a través de la cápsula. Las muestras demasiado gruesas pueden acabar sobrefijadas en el exterior y mal fijadas en el interior, lo que provoca problemas de interpretación debido a los artefactos de tinción.

La fijación inicial debe realizarse a temperatura ambiente, ya que la penetración de la formalina está relacionada con la temperatura de la solución. La formalina debe agitarse suavemente antes de su uso para evitar un gradiente de concentración en el frasco.

El tiempo de fijación depende en cierta medida del grosor del tejido.

• Las monocapas de células cultivadas no necesitan ser fijadas durante mucho tiempo, normalmente 15-30 min son adecuados. Las células cultivadas deben pasar de la fijación a cualquier protocolo que el laboratorio del usuario esté utilizando para la inmunohistoquímica/inmunofluorescencia.
• Los tejidos y órganos deben fijarse (dependiendo de su tamaño) durante 2 horas a un máximo de 24 horas. Después, los tejidos pueden almacenarse durante periodos cortos de tiempo (preferiblemente no más de 3 días) en etanol (aq) al 70%. Un almacenamiento más prolongado en cualquiera de las dos soluciones puede hacer que el tejido se endurezca en exceso y que se dificulte el seccionamiento de los bloques de parafina.

Siguiendo meticulosamente un protocolo de fijación estandarizado se obtendrán los resultados más consistentes.

Formalina vs Formaldehído

Ocasionalmente hemos encontrado cierta confusión sobre la diferencia entre formaldehído y formalina. Se trata de un problema comprensible, ya que los términos se utilizan a veces indistintamente. Es incorrecto utilizar las dos palabras de esta manera. Las concentraciones de fijador químico que representan los dos nombres son bastante diferentes.

Un fijador etiquetado como formalina tamponada al 10% es en realidad sólo una solución de formaldehído al 4%. Esto se debe a que la formalina tamponada al 10% es un ejemplo de la antigua jerga de los histólogos que describe una solución al 10% hecha a partir de un frasco de reserva de formaldehído al 37-40% (o más exactamente: una solución de formaldehído al 3,7-4%).

Seguridad del formaldehído

La Administración de Seguridad y Salud Ocupacional de los Estados Unidos (OSHA) está muy preocupada por el formaldehído. Si no tiene una hoja de datos de seguridad de materiales (MSDS) actualizada en su laboratorio para el formaldehído, puede localizar una en el archivo MSDS de SIRI.

Por favor, sea consciente de los peligros que conlleva el formaldehído. La siguiente declaración procede de una hoja de datos de seguridad para formaldehído al 10%:

“¡PELIGRO! PUEDE SER MORTAL SI SE INGIERE. NOCIVO SI SE INHALA O SE ABSORBE A TRAVÉS DE LA PIEL. CAUSA IRRITACIÓN EN LA PIEL, LOS OJOS Y LAS VÍAS RESPIRATORIAS. FUERTE SENSIBILIZADOR. PUEDE CAUSAR CEGUERA. LIQUIDO Y VAPORES COMBUSTIBLES. SE SOSPECHA QUE ES PELIGROSO PARA EL CÁNCER. CONTIENE FORMALDEHÍDO QUE PUEDE CAUSAR CÁNCER. El riesgo de cáncer depende de la duración y el nivel de exposición”

(para lectores locales) El Departamento de Gestión de Riesgos de la Universidad de Arizona tiene un programa de autoaprendizaje llamado “Hazard Communication Training for Formaldehyde”. Esta guía le introducirá en todos los aspectos relevantes de la norma de formaldehído de la OSHA de 1992. Según Risk Management “se requiere una formación anual para las personas que utilizan soluciones de formaldehído superiores al 0,1% o materiales capaces de liberar más de 0,1 ppm de formaldehído.” Esto incluiría a la mayoría de nosotros que usamos formaldehído para histología o fijadores de microscopía electrónica.

Para obtener una copia del folleto “Hazard Communication Training for Formaldehyde”, póngase en contacto directamente con el Departamento de Gestión de Riesgos y Seguridad (621-1570, sólo para profesores, personal y estudiantes de la Universidad de Arizona).

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