ホルムアルデヒド固定剤

37%ホルムアルデヒドに関する情報

37%ホルムアルデヒドが原液として有用でなくなる明確な年数というものは存在しない。 ホルムアルデヒドの化学的性質は中々複雑ですが、他の顕微鏡技師やメーカーと議論し、関連するテキストを検討した結果、以下の見解が適用可能です。

• ホルムアルデヒドは室温で保存すること（低温ではトリオキシメチレンと白い沈殿の生成を促進）
• 密閉して保存すること（低温では、トリアジドを生成して、その沈殿を生成しない）。 空気に触れるとホルムアルデヒドがギ酸に酸化されやすくなるため（37％ホルムアルデヒドは通常、この変化を抑制するために10～15％のメタノールと一緒に出荷されます）。

37%ストック溶液に関する弊社の推奨事項。 37％ホルムアルデヒド溶液は、無色透明で沈殿物がなく、密栓して日光に当たらない室温で保存されていれば問題ありませんが、それでも1年以上経過したストックボトルの使用はお勧めできません。 開封済みの37％ホルムアルデヒドのボトルは、6ヶ月以上使用しないでください。 そのため、研究室では、おそらく過去に行ったよりも頻繁に、そして少量ずつホルムアルデヒドを購入することをお勧めします。

37%ホルムアルデヒドの使用は、電子顕微鏡用固定剤にはお勧めできません。

10%ホルマリンについての情報

固定剤10%緩衝ホルマリンは、多くの研究室でルーチン組織学用に組織を保存するために一般的に使用されています。 この濃度の組織固定剤では、ホルムアルデヒドが酸化される可能性が高く、緩衝液にもかかわらず、最終的には溶液のpHが低下し始めます。 10%緩衝ホルマリン溶液は、最初に混合してから3ヶ月以内に使用することをお勧めします。 溶液は無色透明で、沈殿物がなく、pHが6.5以下でなければなりません。

10%緩衝ホルマリンのもう一つの問題は、メタノール（ホルムアルデヒドの老化による不要な副産物）の濃度が徐々に増加することです。 メタノールは、ホルムアルデヒドが行うタンパク質の架橋の代わりに、タンパク質の凝集を促進します。 メタノールを含まない固定液は、特に後日抗体染色に組織を使用する場合、最高の保存性を発揮します。

ホルムアルデヒド溶液中のメタノールを避ける最も一般的な方法は、結晶パラホルムアルデヒドから新しい溶液を作ることです。 パラホルムアルデヒドは取り扱いがかなり危険で、溶液化させるのが難しい場合が多いです。

1つの方法は、密封されたアンプルのメタノールフリーホルムアルデヒド(aq)を購入することです。 正しいホルムアルデヒド濃度になるようにPBSを加えるだけで、すぐに使用できます。 16% methanol-free formaldehydeの10mlアンプル10本で約27ドルです。

もう一つの方法は、科学用品店で10% neutral buffered formalin (4% formaldehyde) を購入し、3-6ヶ月使用した後、（有害物質として）廃棄する方法です。 この溶液には若干のメタノール（通常1～2％）が含まれていますが、購入後すぐに使用すれば、ほとんどのユーザーにとって重要ではありません。 緩衝液は、酸性化のプロセスを遅らせるのに役立ちます。 1リットルのボトルで約20～25ドルです。 固定液は室温で保存してください。 このページの読者の方で、購入先が見つからない場合は、CMM Histology Service Lab (626-4415)に連絡してください。 (サプライヤーによって、使用する緩衝液が異なることにご注意ください。 免疫組織化学および/または免疫蛍光を安定的に行うためには、1つのサプライヤーにこだわる必要があります)。

一部のラボでは、バッファリングされていない10%ホルマリンの使用について質問しています。 この固定液は急速に酸性に傾くため、特別な理由がない限りお勧めしません。

最適な標本固定のための推奨事項

組織標本は、動物から取り出したらできるだけ速やかに固定液に入れ、固定液は組織の少なくとも20倍量とし、固定開始から1時間後に固定液の交換が必要である。

組織は、最も薄い寸法が厚さ4～5mmを超えないように切断する（ホルマリンの浸透は遅く、約0.5mm/時）。 これはおよそUSクォーター2枚分の厚さです。 組織や臓器に厚いカプセルがある場合（例：腎臓）、カプセルを通しての固定液の浸透はそれほど速くないので、ユーザーは注意する必要があります。

ホルマリンの浸透は溶液の温度に関係するため、最初の固定は室温で行う必要があります。

固定時間は組織の厚みに依存します。

• 培養細胞の単層は長く固定する必要はなく、通常15-30分程度で十分です。 培養細胞は固定後、ユーザーの研究室が免疫組織化学/免疫蛍光のために使用しているプロトコルに移行します。
• 組織や臓器は（そのサイズに応じて）2時間から最大24時間まで固定する必要があります。 その後、組織は70％エタノール（aq）中で短期間（好ましくは3日以内）保存することができる。

標準化された固定プロトコルに注意深く従うことが、最も安定した結果につながります。

Formalin vs Formaldehyde

私たちは時々、ホルムアルデヒドとホルマリン間の違いについて混乱に遭遇します。 この用語が互換性を持って使用されることがあるので、これは理解できる問題です。 このように2つの言葉を使い分けるのは正しくありません。

10%緩衝ホルマリンと表示されている固定剤は、実際には4%のホルムアルデヒド溶液に過ぎません。 10％緩衝ホルマリンとは、昔の組織学者の専門用語で、37～40％のホルムアルデヒド（正確には3.7～4％のホルムアルデヒド溶液）のストックボトルから作られた10％溶液を表す例だからです。 ホルムアルデヒドの最新の製品安全データシート (MSDS) が研究室にない場合は、SIRI MSDS Archiveで見つけることができます。

ホルムアルデヒドに関わる危険性を認識してください。 次の文章は、10%緩衝ホルマリンのMSDSに記載されています。 飲み込むと致命的な場合があります。 吸入したり、皮膚から吸収されると有害。 皮膚、目、気道に刺激を与える。 強い感作性。 失明の恐れがある。 可燃性の液体および蒸気。 発がんのおそれ。 ホルムアルデヒドを含み、癌を引き起こす可能性がある。 癌のリスクは、暴露の期間とレベルに依存する」

（地元の読者のために）アリゾナ大学リスクマネジメント学部は、「ホルムアルデヒドのための危険有害性周知トレーニング」という自己学習プログラムを持っています。 このガイドでは、1992年のOSHAホルムアルデヒド規格の関連する部分をすべて紹介しています。 リスクマネジメントによると、「0.1％以上のホルムアルデヒド溶液または0.1ppm以上のホルムアルデヒドを放出することができる材料を使用する者は、毎年トレーニングを受けることが必要である」としています。

「ホルムアルデヒドに関する危険有害性周知トレーニング」の配布資料を入手するには、リスク管理・安全学部（621-1570、アリゾナ大学教職員・学生のみ）に直接ご連絡ください。

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このページの作成に協力したのは、CMM Histology Service LaboratoryのAndrea Grantham, HT (ASCP) とFrank Walmsley, B.S., HT (ASCP) である。