Tymczasowe ciąże u myszy można wyznaczyć na dwa sposoby: 1) użyć cytologii pochwy do określenia fazy cyklu rujowego myszy i odpowiedniego czasu na krycie; i/lub 2) sprawdzić samice pod kątem korków pochwowych w celu określenia, czy doszło do krycia.

Ocena cytologii pochwy

Aby uzyskać próbkę pochwy do określenia fazy cyklu rujowego, należy wprowadzić zwilżony wacik do otworu pochwy ręcznie krępowanej myszy. Większość dostępnych w handlu wacików jest zbyt duża, aby łatwo zmieścić się w otworze pochwy średniej wielkości myszy, ale wacik o odpowiednim rozmiarze może być wykonany przez owinięcie niewielkiej ilości sterylnej waty wokół tępego końca wykałaczki. Obrócić wacik delikatnie, ale mocno w pochwie myszy, uważając, aby utrzymać kontakt ze ścianą pochwy. Po wyjęciu wacika wytrzyj go o czyste szklane szkiełko mikroskopowe, aby przenieść próbkę z pochwy na szkiełko. Pozostaw szkiełko do wyschnięcia, a następnie nanieś 0,1% wodny roztwór błękitu metylenowego, aby zabarwić materiał z pochwy. Po wyschnięciu barwnika, zbadać próbkę pod mikroskopem. Etap estrus można określić na podstawie typów i względnej liczby obecnych komórek:

• Jeśli mysz jest w fazie diestrus, widoczne będą głównie leukocyty wielojądrowe (PMN) i niektóre komórki nabłonkowe.
• Jeżeli mysz jest w okresie proestrus, widoczne będą głównie komórki nabłonka jądrzastego i rogowaciejącego. Jeśli mysz jest we wczesnym okresie proestrus, można zobaczyć kilka PMNs.
• Jeśli mysz jest w okresie estrus, zobaczysz głównie zrogowaciałe komórki nabłonkowe. Można zobaczyć kilka komórek jądrzastych, jeśli mysz jest we wczesnym okresie estrus.
• Jeśli mysz jest w okresie rui, widoczne będą głównie zrogowaciałe komórki nabłonka i PMNs oraz kilka jądrzastych komórek nabłonka.

Zarówno krycie jak i owulacja występują zazwyczaj (ale nie zawsze) podczas rui, która zazwyczaj ma miejsce około sześć godzin po rozpoczęciu okresu ciemności i trwa 12-14 godzin. W przypadku hodowli czasowej, należy umieścić samicę z samcem podczas fazy proestrus. Aby sprawdzić, czy doszło do krycia, należy następnego ranka sprawdzić, czy samica nie ma korka pochwowego (patrz poniżej).

Sprawdzanie korków pochwowych

Chociaż ocena cytologii pochwy jest powszechnie stosowana do określenia najlepszego czasu na hodowlę u niektórych gatunków domowych (takich jak psy), nie jest ona tak praktyczna w przypadku myszy, ponieważ mają one bardzo krótki cykl rujowy (łącznie 4-5 dni). Bardziej praktycznym podejściem w przypadku myszy jest po prostu umieszczenie samca i samicy razem, a następnie sprawdzenie samicy wczesnym rankiem następnego dnia pod kątem obecności korka pochwowego. Korek wykonany jest ze skoagulowanych wydzielin gruczołów koagulacyjnych i pęcherzykowych samca. Zwykle wypełnia on pochwę samicy i utrzymuje się przez 8-24 godzin po rozmnażaniu. Aby zobaczyć korek, należy podnieść samicę za podstawę ogona i zbadać jej otwór pochwy w poszukiwaniu białawej masy. Może być ona trudna do zauważenia, zwłaszcza jeśli jesteś mniej doświadczony w tej procedurze. Możesz ją lepiej zobaczyć, jeśli lekko rozchylisz wargi sromowe wacikiem lub tępym końcem płaskiej wykałaczki. Jeśli nie ma wtyczki, zostaw samicę z samcem i sprawdzaj ją każdego ranka, aż zobaczysz wtyczkę.

Jeśli potrzebujesz dużej liczby ciężarnych samic, możesz skorzystać z wpływu feromonów i czynników społecznych na cykl rujowy. Dom samice w dużych grupach bez samców w pobliżu. W ten sposób diestrus zostaje przedłużony, a estrus stłumiony, co jest zjawiskiem znanym jako efekt Whittena. Ponieważ feromony pochodzące od samców myszy mogą zakłócać ten efekt, należy zapobiegać stymulacji węchowej samic trzymanych w grupie przez samce myszy. Po umieszczeniu samic z samcami (zazwyczaj 1-3 samice na jednego samca), cykl rujowy większości samic rozpoczyna się ponownie w ciągu trzech dni. Aby zidentyfikować te, które kopulowały, należy codziennie badać je pod kątem obecności korka pochwowego.

Obecność korka pochwowego nie gwarantuje ciąży: wskazuje jedynie, że doszło do aktywności seksualnej. Prawdopodobieństwo zajścia w ciążę po kryciu różni się w zależności od szczepu myszy i fazy cyklu rujowego, w której dochodzi do krycia. Dla większości szczepów, wskaźnik ciąż jest najwyższy wśród samic z zablokowaną estrus, u których korki pochwowe znaleziono trzeciego dnia po umieszczeniu ich z samcem. Przykładowo, podczas gdy wskaźnik ciąż wynosi odpowiednio ~100% i 44% dla samic C3H/HeJ i BALB/cJ z zatyczkami znalezionymi trzeciego dnia, wynosi on odpowiednio tylko 62% i 31% dla tych z zatyczkami znalezionymi piątego dnia. Dla kontrastu, podczas gdy wskaźnik ciąż u samic C57BL/6J wynosi tylko 39% dla tych, u których zatyczki znaleziono trzeciego dnia, wynosi on 69% dla tych, u których zatyczki znaleziono czwartego dnia.

Jeśli samica z zatorem jest w ciąży, za pierwszy dzień ciąży uznaje się dzień po znalezieniu zatoru.

.