Porozmawiajmy trochę o klonowaniu DNA, które polega na tworzeniu identycznych kopii kawałka DNA i zazwyczaj jest to kawałek DNA, który koduje coś, na czym nam zależy jest to gen, który będzie wyrażał się jako białko, które naszym zdaniem jest przydatne w jakiś sposób teraz może również słyszałeś termin klonowanie w kategoriach Wojen Klonów i Gwiezdnych Wojen lub Dolly owca i to jest powiązany pomysł if you’re cloning an animal or an organism like a sheep well then you are creating an animal that has the exact genetic material as the original animal but when we talk about cloning and DNA cloning we’re talking about something a little bit a little bit simpler all those we’ll see it’s it’s still quite fascinating it’s identical copies of a piece of DNA so how do we do that well let’s say that this is a strand of DNA right over here and I’m just drawing it as a line but this is a double-podwójna nić i po prostu zapiszę to tak jest podwójna nić nie chcę mieć kłopotów z ciągłym rysowaniem wielu nici właściwie pozwól mi po prostu narysować pozwól mi po prostu spróbować narysować dwie nici tylko po to, abyśmy sobie przypomnieli więc idziemy to jest podwójna nić DNA i powiedzmy, że ta część tego DNA ma gen, który chcemy sklonować chcemy zrobić kopie tego tutaj więc gen do klonu gen do klonu dobrze pierwszą rzeczą, którą chcemy zrobić to chcemy chcemy jakoś wyciąć ten gen i sposób w jaki to zrobimy to użycie enzymów restrykcyjnych i jest masa różnych enzymów restrykcyjnych i osobiście uważam, że to fascynujące, że jako cywilizacja doszliśmy do punktu, w którym możemy znaleźć i zidentyfikować te enzymy i wiemy w jakich punktach DNA, które mogą wyciąć, rozpoznają specyficzne sekwencje i wtedy możemy dowiedzieć się, jaki enzym restrykcyjny powinniśmy użyć do wycięcia różnych kawałków DNA. ale doszliśmy do tego punktu jako cywilizacja, więc używamy enzymów restrykcyjnych możemy użyć jednego enzymu restrykcyjnego pozwól mi użyć innego koloru tutaj, że zatrzaskuje się tutaj i identyfikuje sekwencję genetyczną tutaj i tnie we właściwym miejscu, więc to może być enzym restrykcyjny tam i wtedy możesz użyć innego enzymu restrykcyjnego, który identyfikuje się z sekwencją po drugiej stronie, którą chcemy przeciąć więc pozwól mi oznaczyć te te rzeczy tutaj to enzymy restrykcyjne enzymy restrykcyjne i tak teraz po zastosowaniu enzymów restrykcyjnych będziesz miał tylko ten gen możesz mieć trochę po obu stronach ale zasadniczo wyciąłeś gen użyłeś enzymów restrykcyjnych aby wyciąć swój gen i wtedy to co chcesz zrobić to chcesz wkleić go do tego co nazwiemy plazmidem i plazmidem jest to kawałek materiału genetycznego który znajduje się poza chromosomami, ale może się długo rozmnażać lub może się replikować wraz z maszynerią genetyczną organizmu lub może nawet wyrażać siebie, tak jak geny organizmu znajdujące się w chromosomach wyrażają siebie, więc w tym miejscu wycinamy, pozwólcie, że to napiszę, wycinamy, wycinamy gen, a następnie chcemy go wkleić do plazmidu, a plazmidy mają tendencję do bycia kolistym DNA więc wkleimy go do plazmidu i aby pasował do plazmidu często są te zwisy tutaj więc możesz mieć zwis tam możesz mieć zwis tam możesz mieć zwis tam i tak plazmid, który umieszczamy może mieć komplementarne pary zasad nad zwisami co pozwoli na łatwiejszą reakcję ze sobą jeśli mają te zwisy więc pozwól mi wkleić go do plazmidu i to jest Niesamowite, bo oczywiście GNA to nie jest rzecz, którą możemy manipulować rękami w sposób, w jaki kopiujemy i wklejamy rzeczy z taśmą robisz te roztwory i nakładasz enzymy restrykcyjne enzymy restrykcyjne są po prostu w masie tnąc te rzeczy one uderzają w odpowiedni sposób, aby spowodować reakcję następnie bierzesz te G i umieszczasz je z plazmidami, które mają odpowiednie sekwencje na ich końcach tak, że pasują do siebie i wtedy również umieszczasz w pęczku DNA ligazę DNA, aby połączyć kręgosłupy tutaj i widzieliśmy również ligazę DNA, kiedy studiowaliśmy replikację, więc to jest ligaza DNA, którą możesz myśleć o niej jako o pomagającej zrobić wklejenie i tak teraz mamy ten plazmid i chcemy wstawić go do organizmu, który może zrobić kopie dla nas i organizmem, który jest zazwyczaj używany jest lub typ organizmu jest bakteria i e-coli w szczególności i tak co możemy zrobić, to powiedzmy, że mamy garść powiedzmy, że masz fiolkę tutaj masz fiolkę i jest w niej roztwór z garstką e.coli, garstką e.coli i właściwie nie byłoby tego widać wizualnie, ale w tym roztworze jest e. coli, a następnie umieścilibyśmy plazmidy, które jeszcze trudniej byłoby zobaczyć w tym roztworze i w jakiś sposób chcemy, żeby e. coli, żeby bakterie pobrały plazmid, a technika, która jest zazwyczaj wykonywana, polega na podawaniu Typowym szokiem jest szok cieplny i nie jest to w pełni zrozumiałe, w jaki sposób szok cieplny działa, ale tak jest i ludzie używają tego od jakiegoś czasu. tutaj ma ona swoje istniejące DNA więc to jest jej istniejący materiał genetyczny tam i pozwólcie mi oznaczyć to jest bakteria umieszczacie ją w obecności naszych plazmidów więc umieszczacie ją w obecności naszych plazmidów i stosujecie szok termiczny i część z tej bakterii ma zamiar pobrać plazmid, który i tak po prostu będzie go przyjmować i to co wtedy zrobisz, to umieścisz roztwór z bakteriami, z których część będzie przyjmować plazmid i umieścisz go, a następnie spróbujesz wyhodować bakterie na płytce, więc pozwól mi to narysować, więc pozwól mi to narysować, więc tutaj mamy płytkę do hodowli bakterii i ma ona składniki odżywcze, które mogą rosnąć na niej bakterie, ma składniki odżywcze, ma składniki odżywcze i można powiedzieć, że włożymy to tutaj i wtedy grupa bakterii będzie rosła, więc zobaczysz rzeczy takie jak ta, która będzie miała wiele komórek bakterii. Byłaby to kolonia bakterii. Mógłbyś pozwolić im rosnąć, ale jest pewien problem, ponieważ wspomniałem, że niektóre z bakterii przyjmą plazmidy, a niektóre nie, więc nie wiesz, kiedy ta bakteria, kiedy się replikuje, może utworzyć jedną z tych kolonii. kolonii, więc to jest kolonia, która ci się podoba, więc ta jest dobra, zaznacz ją, ale może ta kolonia jest utworzona przez początkową bakterię lub zestaw bakterii, które nie pobrały plazmidu, więc nie będzie zawierać rzeczywistego genu, więc nie chcesz tej kolonii, więc jak wybrać bakterie, które co robisz, to oprócz genu, o który dbasz, a który chcesz skopiować, umieszczasz również gen odporności na antybiotyki w swoim plazmidzie, więc teraz masz gen odporności na antybiotyki, więc tylko bakterie i myślę, że to niesamowite, że my jako ludzkość jesteśmy są w stanie zrobić tego typu rzeczy, ale teraz tylko bakterie, które wzięły plazmid będą miały tę odporność na antybiotyki i tak, co robisz, to w swoich składnikach odżywczych przenosisz składniki odżywcze plus antybiotyki plus antybiotyk antybiotyczny i tak ta jedna przetrwa, ponieważ ma tę odporność, ma ten gen, który pozwala mu nie być podatnym na Mattox, ale te nie przetrwają, nawet nie będą rosły, bo są antybiotyki zmieszane z tymi składnikami odżywczymi. To całkiem fajna rzecz. Zacząłeś od genu, na którym ci zależało, wyciąłeś go i wkleiłeś do naszego plazmidu. do naszego plazmidu, który również zawierał gen, który może dać odporność na antybiotyki każdej bakterii, która weźmie plazmid. Umieszczasz te plazmidy w obecności bakterii lub zapewniasz jakiś rodzaj szoku, może szok cieplny, tak, że niektóre bakterie biorą je. i wtedy bakteria zaczyna się rozmnażać i w miarę jak się rozmnaża, rozmnaża też plazmidy, a ponieważ ma odporność na antybiotyki, będzie rosła na tej mieszaninie pożywek z antybiotykami, a inne bakterie, które nie pobrały plazmidów, nie będą rosły. możesz wziąć tę kolonię tutaj i umieścić ją w innym roztworze lub kontynuować hodowlę i będziesz miał wiele kopii tego genu, które są wewnątrz tej bakterii. Teraz następne pytanie i zbytnio upraszczam rzeczy dość dramatycznie, jak teraz masz kilka bakterii, które mają kilka kopii tego genu, jak to wykorzystać? Cóż, same bakterie, powiedzmy, że ten gen jest dla czegoś, co chcesz wyprodukować, powiedzmy insuliny dla diabetyków. Mógłbyś właściwie użyć tej bakteryjnej maszynerii. Używamy jej do reprodukcji informacji genetycznej, ale możesz też use it’s it’s it’s it’s productive machinery I guess you could say it’s going to express its existing in DNA but it can also express the genes that are on the plasmid in fact that’s what gives it its aunt that’s what would give the bacteria its antibiotic resistance but because if this gene was say for insulin well then the bacteria Bakterie będą produkować garść insuliny, garść cząsteczek insuliny, które możesz wykorzystać w jakiś sposób i nie zamierzam zagłębiać się we wszystkie szczegóły jak wydobędziesz insulinę i jak możesz ją wykorzystać, ale nie muszę dodawać, że to całkiem fajne, że mogliśmy nawet dojść do tego punktu